יצירה ותחזוקה של אסטרוספירות באמצעות תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

התחל עם צלחת מצופה ECM ואשכולות זרעים של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים במצע גידול המכיל מעכבי רו-קינאז.

ECM משפר את החיבור לתאים, בעוד שהמעכבים חוסמים רו-קינאזות, מונעים מוות של תאים אפופטוטיים ומקדמים את הישרדות התאים והתפשטותם.

להציג מדיום התמיינות עצבי כדי לגרום להתמיינות תאי גזע לתאי אב עצביים.

לטפל בתמיסת ניתוק; האנזימים בתמיסה זו מפרקים את ה-ECM ואת המגע בין התאים, ומשחררים את התאים.

העבירו אותם לבקבוק לא מצופה המכיל מעכבי רו-קינאז.

המעכבים מקלים על הישרדות התאים והצבירה ספונטנית למבנים תלת מימדיים או ספרואידים.

השלם את הספרואידים עם מדיום התמיינות עצבי עשיר בגורמי גדילה, המאפשר לתאי אב עצביים להתמיין לאבות אסטרוציטים וליצור אסטרוספרות.

באופן קבוע, הוסיפו פתרון ניתוק כדי להפריד את האסטרוספרות לצבירים קטנים יותר. זה מאפשר לחומרים מזינים להגיע לתאים הפנימיים של הספרואיד ולשמור על חיותם.

שמרו על האסטרוספרות בתווך רענן כדי שאבות אבותיהם יתבגרו לאסטרוציטים.

התחל בזריעת אשכולות של hPSCs ב-2 מיליליטר של מדיום hPSC המכיל את מעכב Rho-kinase Y-27632 לכל באר של צלחת מצופה ECM עם שש בארות. שמור על תאי הגזע עד שהם מתכנסים בכ-50%. לאחר מכן, שנה את המדיום למדיום עצבי המכיל SP-431542 ו-DMH1 כדי לקדם אינדוקציה עצבית.

כאשר התאים מתכנסים בכ-95%, חלקו כל באר 1 עד 6 לבארות חדשות מצופות ECM. ביום