אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:16 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת מרובת בארות המצופה במטריצה חוץ-תאית, או ECM.
לבארות נפרדות, הכניסו תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים שאינם טרנסגניים וטרנסגניים, או hPSCs, במדיום תרבית.
hPSCs טרנסגניים נושאים טרנסגן תחת מקדם השראת אנטיביוטיקה. הטרנסגן מקודד גורם שעתוק הגורם להתמיינות עצבית.
דגירה כדי להקל על הידבקות התאים ל-ECM. מולקולות קטנות במדיום מונעות אפופטוזיס, ומקדמות את התפשטות התאים.
הוסיפו תמיסת ניתוק כדי להפריד את התאים; הוסיפו את המדיום כדי לעצור את הדיסוציאציה, ואז העבירו אותם למיקרו-פלטה אחרת מצופה ECM כדי לאפשר התפשטות תאים.
הכנס מדיום התמיינות עצבי המכיל מולקולות קטנות על התאים הלא טרנסגניים ואת האנטיביוטיקה המשרה על התאים הטרנסגניים.
המולקולות הקטנות גורמות לתאים לא טרנסגניים להתמיין לתאי אב עצביים או NPCs. בתאים הטרנסגניים, הביטוי המושרה על ידי אנטיביוטיקה של גורם השעתוק מפעיל את הגנים הנדרשים להתמיינות ל-NPCs.
שמור על ה-NPCs בתרבית עבור יישומים במורד הזרם.
ליצירת אבות עצביים ונוירונים לא טרנסגניים, או hNeurons, ראה יום 14 אבות עצביים שמקורם ב-hPSC לתוך צלחות שש בארות מצופות ECM עם 2 מיליליטר של מדיום עצבי ו-Y27632 לבאר.
אם עובדים עם iNeurons המושרים על ידי דוקסיציקלין, הוסף מדיום עצבי המכיל דוקסיציקלין כאשר התאים מתכנסים בכ-35% כדי לגרום להתמיינות ולהפעיל ביטוי גנים. לאחר יומיים, האכילו קווים טרנסגניים ולא טרנסגניים ב-2 מיליליטר של מדיה עצבית לבאר ליום. המשך עד שהתאים מוכנים להתרומם במפגש של 70%.