שיטת In Vitro ליצירת פיגומים אסטרוציטים בתוך מיקרו-עמודות הידרוג'ל
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:49 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת תרבית המכילה סירת מיקרו-עמודים המורכבת מצינורות חלולים בקוטר מוגדר.
המיקרו-עמודים, העשויים מהידרוג'ל, מלאים בחיץ למניעת ייבוש.
תחת סטריאומיקרוסקופ, הסר את המאגר והוסף תמיסת קולגן קרה כקרח, מרכיב של המטריצה החוץ-תאית.
הכניסו מדיה לאורך הקצה הפנימי של המנה כדי לשמור על לחות העמודים. דגירה בתנאים פיזיולוגיים כדי שהקולגן יתפלמר ויוצר ציפוי בתוך המיקרו-עמודים.
הוסיפו אסטרוציטים בתוך המיקרו-עמודות ודגרו כדי לקדם הידבקות אסטרוציטים לקולגן.
לאחר מכן, מלאו את המנה במדיום ושמרו עליה בתנאים פיזיולוגיים.
בשל הקוטר הצר של המיקרו-עמודים, האסטרוציטים רוכשים מורפולוגיה דו-קוטבית עם תהליכים המשתרעים לאורכם.
עם הזמן, האסטרוציטים מתאספים בעצמם ויוצרים פיגום תלת-ממדי שמכיל צרורות צפופים של תהליכי אסטרוציטים.
פיגום האסטרוציטים עטוף ההידרוג'ל מוכן לבדיקות במורד הזרם.
בתוך ארון בטיחות ביולוגית, הכינו תמיסה של 1 מיליגרם למיליליטר של קולגן מסוג זנב חולדה מסוג I במדיום תרבית משותפת ולאחר מכן הניחו אותה על קרח. התאם את ה-pH של תמיסת ה-ECM עם חומצה או בסיס לפי הצורך, עד שה-pH יציב בטווח של 7.2 עד 7.4. העבירו את סירת המיקרו-עמוד לצלחת פטרי של 35 או 60 מיליליטר בעזרת מלקחיים. השתמש בסטריאוסקופ להנחיה, מקם את קצה המיקרופיפטה בנפח 10 מיקרוליטר בקצה אחד של כל מיקרו-עמוד ושאיבה כדי לרוקן את לומן ה-DPBS ובוע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים