ציפוי מחדש של תאי עצב ממוינים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

התחל עם לוחית תרבית גדולה המכילה נוירונים מובחנים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים עם רשת עצבית צפופה.

דגרו את הנוירונים הללו עם אנזימים פרוטאוליטיים עדינים כדי לנתק אותם מהצלחת, והרימו אותם כסדין.

עם הדגירה המתמשכת, אנזימים משבשים חלקית את חיבורי התאים, ומשחררים את הרשתות העצביות.

הוסף מדיום תרבית כדי לעצור את פעילות האנזים.

הפעילו שוב ושוב את הנוירונים המנותקים כדי להפריד אותם זה מזה.

סננו את הנוירונים דרך מסננת תאים כדי להסיר גושי תאים ולאסוף את הנוירונים הבודדים.

צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט. השעו אותם במדיום גידול.

לצורך ציפוי מחדש, זרעו את הנוירונים הללו על פולימר וצלחת מרובת בארות מצופה חלבון הדבקה. דגירה כדי לאפשר את התקשרותם.

נוירונים מנצלים חומרים מזינים מהמדיום כדי להישאר ברי קיימא. החלף את מדיום התרבית באופן קבוע כדי לשמור על רמות החומרים המזינים.

דגירה נוספת כדי לאפשר התבגרות עצבית ויצירת קשרים ביניהם.

התחל בשטיפה עדינה של צלחת הנוירונים המובחנים עם PBS. פזרו את ה-PBS לאורך דופן הצלחת, ולא ישירות על התאים כדי למנוע שיבוש שלהם. שאפו את ה- PBS מקצה המנה תוך כדי הטיה, תוך הקפדה לא לגעת בתאים.

מרחו לפחות 1 מיליליטר של אנזים פרוטאוליטי לכל צלחת של 10 סנטימטרים, והחזירו את התאים לחממה למשך 40 עד 45 דקות. במהלך הדגירה, בדקו נוירונים במיקרוסקופ ניגוד פאזה, והמשיכו בטיפול ב