פיתוח אורגנואידים עצביים מוטוריים אנושיים שמקורם ב-iPSC באמצעות שבב מיקרופלואידי
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 5:23 דק׳ • July 8th, 2025
קח תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים, או iPSCs, במדיום תאי גזע עשיר בחומרים מזינים עם מעכבי רו-קינאז.
המעכבים נכנסים לתאים וחוסמים אנזימי רו-קינאז, ומונעים מוות של תאים אפופטוטיים.
התאים מנצלים את חומרי המזון כדי להתרבות ולהצטבר באופן ספונטני ליצירת מקבץ תאים תלת מימדי הנקרא ספרואיד.
בהדרגה, החלף את המדיום במדיום אינדוקציה עצבית. מודולטורים של איתות מהמדיום מניעים את ההתמיינות של תאי גזע לתאים עצביים.
החלף במדיום עצבי עשיר בגורמי גדילה כדי להבדיל את התאים הספרואידים לנוירונים מוטוריים וליצור ספרואיד נוירון מוטורי או MNS.
העבירו את ה-MNS הללו לשבב מיקרופלואידי-נוזלי מצופה פולימר המכיל מדיום התבגרות.
גורמי הצמיחה העצביים במדיום מגרים את האקסונים או הקרנות ארוכות יותר של נוירונים לצמוח מהספרואיד ולהתפשט דרך המיקרו-ערוץ של השבב.
זה יוצר אורגנואיד עצב מוטורי, מודל תלת מימדי של רקמת עצב מוטורית.
כדי לגרום להתמיינות תאי iPS תלת מימדיים לנוירונים מוטוריים, זרעו 4 x 104 תאי iPS לבאר לתוך המספר המתאים של בארות של צלחת תחתית U של 96 בארות ב-100 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאים מזין ונטול סרום בתוספת 10 מיקרו-מולרי Y27632.
למחרת, החלף את הסופרנטנט בכל באר ב-100 מיקרוליטר של מדיום KSR בתוספת 10 מיקרו-מולרי SB-431542 ו-100 ננו-מולרי LDN-193189. בימים 2 ו-3, החלף את הסופרנטנטים ב-100 מיקרוליטר של
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים