תכנות מחדש ישיר של תאי אב המטופויטיים לתאי גזע עצביים

התחל בהשעיית תאים של תאי אב המטופויאטיים שעברו שינוי גנטי.

תאים אלה מבטאים גורמי שעתוק הנדרשים לתכנות מחדש שלהם לתאי גזע עצביים. תהליך זה נקרא תכנות מחדש ישיר.

העבירו את התאים לצלחת רב-בארות מצופה מטריצה חוץ-תאית עם מדיום אב עצבי, ודגרו.

המטריצה החוץ-תאית מספקת פיגום תלת מימדי לחיבור וצמיחה של תאים.

במהלך הדגירה, גורמי שעתוק המתבטאים על ידי תא האב ההמטופויאטי יוזמים רצף של אירועים מולקולריים המאפשרים את הפיכתו לתא גזע עצבי.

מדיום האב העצבי מכיל גורמים המעדיפים את הישרדותם של תאי גזע עצביים מושרים.

לאחר הדגירה, החלף מדיום זה במדיום אב עצבי טרי כדי לקדם את הכפלת התאים.

נתק את התאים באמצעות מגרד תאים.

אסוף את התרחיף הזה והעביר את התאים למדיום תאי גזע עצבי המכיל היטב.

דגירה לתחזוקה של תאי גזע עצביים מושרים.

כאשר התאים מתכנסים 30 עד 50%, שאבו את הסופרנטנט והמילואים, ואז הוסיפו 1 מיליליטר של מדיום אב עצבי לכל באר. כדי ליצור צלחת גיבוי באמצעות הכדורים בסופרנטנט, צנטריפוגה את הסופרנטנט המילואים ב-170 פעמים גרם למשך 10 דקות.

לאחר מכן, שאפו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגלולה בתווך אב עצבי. צלחת בצלחת מצופה מטריג'ל 24 בארות; החלף את המדיום בכל צלחת תאים אחת ליומיים עד שהתאים מגיעים למפגש של 60% עד 80%, בדרך כלל לאחר שבוע.

ברגע שהתאים מגיעים למפגש הנדרש, שאפו את הסופרנטנט והוסיפו 1 מיליליטר של מדיום תאי גזע עצביים לכל באר. לאחר מכן, נתק את התאים באמצעות מגרד תאים ואחריו פיפטינג עדין מאוד.

לאחר מכן, העבירו את התאים מבאר אחת של צלחת 24 בארות לבאר אחת של צלחת 6 בארות. הוסף עוד מיליליטר מדיום לבאר, ולאחר חזרה על ההליך עבור כל הבארות, הנח את צלחת 6 הבארות לחממת הפחמן הדו חמצני של 37 מעלות צלזיוס 5%.

שנה את הנפח המלא של המדיום כל יומיים עד שהתאים מגיעים למפגש של 60%. לאחר כל פעם, נתק וצלח מחדש את התאים ביחס של 1 ל-3 כפי שהוצג זה עתה.