בידוד מושבות תאי אב עצביים המושרים שמקורם בפיברובלסטים אנושיים בוגרים

התחל בתרבית דבקה של מושבות תאי אב עצביים מושרות שמקורן בפיברובלסטים אנושיים בוגרים בצלחת מרובת בארות מצופה למינין.

שטפו את המושבות עם חיץ כדי להסיר תאים שאינם נדבקים, ולאחר מכן הוסיפו חיץ טרי.

מגרדים סביב מושבות בודדות כדי להסיר את התאים שמסביב.

העבירו את המושבות לבארות טריות מצופות למינין המכילות מדיום נוירואינדוקציה.

לפרק מכנית את המושבות כדי לקבל תרחיף חד-תאי.

למינין, חלבון מטריצה חוץ-תאי, מקיים אינטראקציה עם חלבוני פני השטח של האבות, ומקל על הידבקות התאים למשטח הבאר.

הוסף מעכב מולקולה קטן שנכנס לתאים וחוסם קינאזות חלבון ספציפיות, ומונע אפופטוזיס תאי.

גורמי גדילה ומולקולות קטנות הקיימות במדיום הנוירואינדוקציה מקלים על התפשטות האבות.

החלף מעת לעת את המדיום כדי לחדש את החומרים המזינים, מה שמקל על המשך התפשטות האב.

תרבית קונפלואנט, או שכבת תאים מכוסה במלואה, מצביעה על התרחבות מוצלחת של תאי אב עצביים מושרים.

יום לאחר מכן, שאפו למינין מהצלחות והוסיפו 200 מיקרוליטר של מדיום אינדוקציה עצבי לבארות. שטפו את צלחות שש הבארות המכילות את המושבות שיש לקטוף, פעם אחת עם DPBS, לפני הוספת 2 מיליליטר של מדיום אינדוקציה עצבית לבאר של צלחת שש בארות.

קוטפים את התאים באופן מכני על ידי גירוד סביב המושבות באמצעות מחט דקה כדי להיפטר מהתאים שמסביב, ובחירת המושבות באמצעות קצות פיפטות המורכבות על איש פיפטה של 200 מיקרוליטר המונח על 50 מיקרוליטר.

העבירו כל מושבה לבאר אחת של צלחת מצופה למינין של 48 בארות וצרו תרחיף חד-תאי באופן מכני על ידי פיפטינג למעלה ולמטה 10 פעמים. הוסף מעכב רו-קינאז בריכוז סופי של 10 מיקרומולר לתאים. גדל את התאים על צלחת 48 בארות ב-37 מעלות צלזיוס, 5% CO₂ למשך יומיים. שנה את המדיום כל יומיים עד שהתאים מגיעים למפגש של 80% עד 90%.