התמיינות של קו תאי נוירובלסטומה אנושיים לתאי עצב בוגרים

התחל עם קו תאי נוירובלסטומה לא ממוין המורכב מתאים דמויי נוירונים ודמויי אפיתל במדיום בעל ריכוז סרום גבוה.

הסר את המדיום והוסף מדיום התמיינות המכיל ריכוז סרום מופחת, בתוספת חומצה רטינואית.

מחסור בסרום מונע התפשטות תאים דמויי אפיתל.

חומצה רטינואית גורמת לביטוי גנים עצביים בתאים דמויי הנוירונים, והופכת אותם לפנוטיפ מובחן יותר.

הוסף קוקטייל טריפסין-EDTA כדי לנתק את התאים הממוינים חלקית.

הוסף מדיה המכילה חלבוני סרום כדי לחסום טריפסין.

צלחת התאים והכנסת מדיום התמיינות טרי המכיל חומצה רטינואית ורמת סרום מופחתת עוד יותר.

התאים ממשיכים לפתח תהליכים ממושכים.

הוסף טריפסין כדי לנתק את התאים.

לאחר מכן, הוסיפו חומר לחסימת טריפסין וצלחו את התאים על צלחת מצופה חלבון מטריצה חוץ-תאית כדי לקדם הידבקות תאית.

לבסוף, תוסף עם מדיום נטול סרום המכיל גורמי גדילה עצביים.

גורמים אלה גורמים להתמיינות סופנית לנוירונים בוגרים המציגים תהליכים נוירוניים מסועפים נרחבים.

ביום האפס, ספרו את התאים באמצעות המוציטומטר. לאחר מכן, יש לדלל את תרחיף התאים ל-50,000 תאים למיליליטר באמצעות אמצעי גידול בסיסיים. צלחת 2 מיליליטר תאים לכל צלחת של 35 מילימטר, בסך הכל 100,000 תאים למנה. לאחר מכן, הניחו את התאים בחממה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.

ביום הראשון, הוסף RA למדיה המחוממת והמאוזנת. שאפו בעדינות את המדיה הישנה והשליכו. לאחר