יצירת תאי עצב על-ידי תכנות מחדש של תאי פיברובלסט עוריים אנושיים

הכנס פיברובלסטים עוריים אנושיים בוגרים או aHDFs, תלויים במדיום פיברובלסטים, למיקרו-צלחת מצופה חלבון מטריצה חוץ-תאית. דגירה כדי לאפשר היצמדות לתאים.

הציגו וקטור לנטי-ויראלי טרנסגני. עם ההפנמה בתא המארח, ה-RNA הנגיפי עובר העתקה הפוכה ל-DNA, המשתלב בגנום המארח.

ה-DNA הנגיפי מבטא גורמי שעתוק ו-RNA קצר סיכת ראש, או shRNAs. נוקלאזות תאיות מעבדות את ה-shRNAs ל-RNA או siRNA מפריעים קטנים.

ה-siRNAs שנוצרו מפרקים את ה-mRNA המקודד מדכאי שעתוק, ובכך מעכבים את ביטוים ומאפשרים הפעלה של גנים להתמיינות עצבית.

גורמי השעתוק מפעילים את הגנים, ומקדמים התמיינות עצבית של ה-aHDFs.

הסר את המדיום המכיל את הווקטורים הלא מופנמים.

הוסף מדיום המרה עצבי מוקדם המכיל גורמי גדילה ומולקולות קטנות הגורמות להתמיינות לתאים דמויי נוירונים.

החלף את המדיום במדיום המרה עצבי מאוחר המכיל גורמים נוירוטרופיים להתבגרות לנוירונים.

הנוירונים הבוגרים מוכנים לבדיקות במורד הזרם.

הכן תרחיף סלולרי של 1,320,000 תאים ב-13.2 מיליליטר של מדיום פיברובלסטים על מנת להשיג 100,000 תאים למיליליטר מדיום. לאחר שאיבת הג'לטין מהצלחת, שטפו את הצלחת עם מי מלח עם חוצץ פוספט של דולבקו פעמיים. לאחר מכן, הוסיפו 500 מיקרוליטר של תרחיף תאים לכל אחת מהבארות, ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה.

חם 13.2 מיליליטר פיברובלסטים בינוני עד 37 מעלות צלזי