ניתוק וטיפוח תאי עצב מדגימות רקמת ההיפוקמפוס

התחל עם דגימות רקמת היפוקמפוס המכילות נוירונים ותאים שונים שאינם עצביים.

הוסף תמיסת אנזים פרוטאז. האנזים מפרק את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה, ויוזם דיסוציאציה של תאים.

יש לשטוף עם מדיום ציפוי להסרת שאריות אנזימים.

פיפטה את הרקמה המעוכלת שוב ושוב כדי לנתק מכנית את התאים מהרקמה, וליצור תרחיף של תא בודד.

צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים במדיום הציפוי.

זרע את התאים על כיסוי מצופה פולי-D-ליזין בצלחת מרובת בארות. ליזין משפר את החיבור לתאים.

החלף את מדיום הציפוי במדיום תחזוקת נוירונים המכיל חומרים מזינים חיוניים להישרדות נוירונים.

רענן מחצית מהמדיה עם אמצעי תחזוקה המכיל ארבינוזילציטוזין, או Ara-C.

Ara-C נכנס לתאים ומעכב באופן סלקטיבי את צמיחתם של תאים שאינם עצביים, מה שמוביל למותם.

החלף את המדיה באמצעי תחזוקה טריים כדי לתמוך בהישרדות תאי העצב.

כדי לנתק את נוירוני ההיפוקמפוס לצורך תרבית, יש להפשיר את תמיסת האנזים פרוטאז, ולחמם מראש את מדיום הציפוי ב-37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, שטפו את ההיפוקמפוס המנותח עם SLDS. לאחר מכן הסר אותו, והוסף 2 מיליליטר תמיסת אנזים פרוטאז, ודגר את הדגימה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

לאחר מכן, שטפו את ההיפוקמפוס עם 5 עד 10 מיליליטר של מדיום ציפוי פעמיים, והוסיפו 5 מיליליטר של מדיום ציפוי. להפריד את ההיפוקמפוס לתאים בודדים על ידי יצירת מע