יצירת תרבית אורגנואידים מתרחיף תאי גידול במוח

התחל עם צינור מיקרו-צנטריפוגה המכיל מטריצה חוץ-תאית עשירה בלמינין או lrECM. למינין הוא מרכיב מבני הקיים בשפע במוח.

שמור את הצינור על קרח כדי למנוע פילמור IrECM.

מוסיפים תאי גידול במוח ומערבבים היטב כדי להבטיח פיזור אחיד של התאים.

לאחר מכן, העבירו את התערובת לתבניות פרפילם וצרו טיפות.

דגירה כדי להקל על פילמור lrECM ליצירת פיגום, המחקה את הסביבה הטבעית של התאים.

כעת, שטפו את האורגנואידים המוצקים לתוך צלחת פטרי המכילה מדיום תרבית, ואז דגרו.

מדיום התרבות מספק חומרים מזינים חיוניים וגורמי גדילה, התומכים בחלוקת התאים.

בתוך האורגנואיד, תאים מתארגנים בעצמם על ידי נדידה ופלישה.

לאחר הדגירה, הטה את הצלחת כדי ליישב את האורגנואידים.

הסר בזהירות את המדיום העודף והוסף מדיום טרי.

דגירה עם ניעור עדין.

זה מפיץ את החומרים המזינים באופן שווה ומשפר את צמיחת האורגנואידים.

כדי ליצור אורגנואידים מתרחיף חד-תאי, הוסף כמות מתאימה של מטריצה חוץ-תאית עשירה בלמינין או lrECM לתוך צינור צנטריפוגה קטן בדלי קרח או בלוק קר.

הכינו תערובת תאים המכילה 20,000 תאים לכל אורגנואיד. מערבבים היטב את תערובת תרחיף התאים lrECM כדי למנוע שקיעת התאים, מה שיגרום להיווצרות אורגנואידים לא אחידה. לאחר מכן, פיפטה בזהירות 20 מיקרוליטר מהתערובת על תבנית פרפילם ליצירת טיפה דמוית פנינה. הקפד לקרר את קצה הפיפטה כל שניים עד שלושה אורגנואיד