JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 4:00 דק' • July 8th, 2025
התחל בזריעת תאי גזע עובריים אנושיים על צלחת מרובת בארות מצופה מטריצה.
סביבת המטריצה מונעת התבגרות בטרם עת לתא מיוחד.
הוסף מדיום תחזוקה מתאים בתוספת דימתיל סולפוקסיד או DMSO.
טיפול ב-DMSO מגביר את תגובת התאים לאותות התבגרות.
לאחר מכן, החלף את המדיום במדיום אינדוקציה עצבי המכיל מעכבים ספציפיים.
מעכבים חוסמים את האותות של התפתחות תאים לא עצביים, ומנחים את תאי הגזע להפוך לתאי אב עצביים או NPCs.
החלף את המדיום בתמיסת ניתוק כדי לנתק את ה-NPCs. צלח מחדש את מספר התאים הרצוי לצלחת מרובת בארות אחרת.
הוסף מדיום התמיינות ספציפי לתא בתוספת DMSO כדי לקדם את הטרנספורמציה של NPCs לתאי מבשר אוליגודנדרוציטים או OPCs.
החלף את המדיום במדיום התבגרות ספציפי לתא כדי להקל על התפתחות OPCs לאוליגודנדרוציטים.
כדי לבצע יצירת תאי אב עצביים, תרבית תאי גזע אנושיים H1 והפיכתם לתאי אב עצביים, כמתואר בכתב היד הטקסטואלי. ביום שלילי 1, זרע 0.5 עד 1 מיליון תאים במדיום תחזוקת תאי ES לכל באר של צלחת של 6 בארות, מצופה בתמיסת מטריצה מופחתת גורם גדילה.
ביום האפס, טפל בתאים במשך 24 שעות עם מדיום תחזוקת תאי ES, בתוספת 2% DMSO. בימים 1 עד 6, החלף את המדיה המלאה עם מדיום אינדוקציה עצבי חם המכיל מעכבי SMAD מערכה מסחרית. ביום השביעי, העבירו NPCs באמצעות תמיסת ניתוק תאים, וצלחו אותם בצפיפות ישיבה של 1 עד 2 x 105 תאים לבאר של צלחת של 24 בארות.
כדי ליצור תאי מבשר אוליגודנדרוציטים, צלחו את ה-NPCs במדיום אינדוקציה עצבי חם עם מעכבי SMAD מערכה מסחרית. ביום 8, הכינו תמיסה של 1% DMSO במדיום ההתמיינות OPC, וטפלו ב-NPCs המצופים למשך 24 שעות. ביום 9, החלף את המדיה במדיום התמיינות OPC טרי ללא DMSO, ולאחר מכן הזין את התאים כל יומיים עד היום ה-15.
אם התאים מגיעים למפגש לפני היום ה-15, העבירו אותם לצפיפות הזריעה של 1 עד 2 x 105 תאים לבאר. ביום 14, OPCs צלחת במדיום התמיינות OPC בצפיפות של 1 עד 2 x 105 תאים לבאר בצלחת של 24 בארות. ביום ה-15, החלף את המדיה במדיום התבגרות OL.
שנה את המדיום כל יומיים או כל יום. כאשר התאים מגיעים למפגש של 90%, פצלו אותם ביחס של 1 ל-3 למשך עד שני מעברים, או עד שחלוקת התאים מאטה באופן משמעותי. אם OPCs מתחלקים מהר מדי ומגיעים למפגש תוך פחות משלושה ימים, הוסף Ara-C בריכוז של 2 עד 5 מיקרומולר למשך יום עד שלושה ימים.