טכניקה ליצירת מונושכבה דו-ממדית של תאי המוח הקטן מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים

התחל עם מושבות תאי גזע פלוריפוטנטיות המושרות על ידי בני אדם שגודלו על מטריצת קרום בסיס דביקה.

הוסף מדיום התמיינות מוחי המכיל הורמון ספציפי, גורם גדילה ומעכבי מולקולות קטנות.

הרם את המושבות באמצעות פיפטת זכוכית, והעביר אותן לצלחת חיבור נמוכה במיוחד.

משטח ההתקשרות הנמוך שומר על התאים בתרחיף, ומקל על הצטברותם לגופים עובריים תלת מימדיים, או EBs.

ההורמון, גורם הגדילה והמעכבים נקשרים לאתרי היעד שלהם, ומקדמים התמיינות של תאי גזע לאבות עצביים.

העבירו את ה-EBs לבארות צלחת תרבית המצופות בפולימר סינטטי וחלבון הדבקה כדי להקל על חיבור EB.

החלף את המדיום במדיום התמיינות נטול מעכבים.

התאים מתחילים לנדוד החוצה מה-EBs, ויוצרים שכבה חד-ממדית דו-ממדית.

הסר את המדיום והוסף מדיום התבגרות מוח.

גורמי גדילה במדיום גורמים להתבגרות של אבות עצביים לקודמנים עצביים מובחנים במוח.

ביום האפס, הוסף 1 מיליליטר של מדיום התמיינות מוחי בתוספת 10 מיקרו-מולרי Y27632 ו-SB431542 לכל באר של שש בארות חיבור נמוך במיוחד או צלחת ULA, והנח אותו באינקובטור עד שהמושבות המורמות מוכנות להוספה לבארות. נקה את התאים המובחנים באמצעות פיפטת זכוכית משוכה. שאפו את המדיום, והוסיפו 1 מיליליטר של תמיסת מעבר iPSC לכל צלחת של 35 מילימטר.

לאחר שלוש דקות של דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, יש לשאוב את המדיום ולהוסיף 2 מיליליטר של מדיום התמיינ