JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 2:16 דק' • July 8th, 2025
התחל עם צלחת תרבית מצופה פולימר סינטטי וחלבון הידבקות.
הוסף תאי אב עצביים של חוט השדרה המושעיים במדיום התמיינות נוירונים מוטוריים, בתוספת מעכב מולקולה קטנה.
משטח הצלחת המצופה מקל על הידבקות התאים.
מעכב המולקולה הקטנה חוסם קינאזות חלבון ספציפיות, ומונע אפופטוזיס תאי.
הסר את המדיום המושקע והוסף מדיום בידול טרי.
המדיום מכיל תרכובת המקדמת התמיינות אב עצבי לאבות עצביים לאבות נוירונים מוטוריים.
בנוסף, מופיעים אבות מחויבים לגליה.
לאחר מכן, החלף במדיום התמיינות בתוספת מעכב סינתזת DNA.
מעכבים אלה גורמים באופן סלקטיבי לנזק ל-DNA ולמוות באבות הגליה, בעוד שאבות הנוירונים המוטוריים מתמיינים לנוירונים בוגרים.
שטפו את התאים עם חיץ והוסיפו את מדיום ההתמיינות ללא מעכבים כדי לשמור על הנוירונים.
במהלך התרבות, החלף באופן קבוע את המדיום לחידוש חומרים מזינים.
בנוסף, החלף את המדיום במדיום בתוספת חלבון הידבקות כדי לשפר את ההתקשרות העצבית, תוך יצירת תרבית נוירונים מוטורית הומוגנית.
אם תרביות תאי האב העצביים היו קפואות, הפשירו אותן. לאחר החלפת מדיום ושטיפת PBS כמתואר בכתב היד, החלף את המדיום עם מדיום התמיינות נוירונים מוטוריים המכיל 0.02 ציטוזין ארבינוזיד מיקרומולרי.
לאחר מכן, דגרו על התאים למשך 48 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני כאשר אבות קדמונים המחויבים לגליה מופיעים כתאים שטוחים בודדים המתרבים תחת אבות נוירונים מוטוריים פוסט-מיטוטיים המצטברים באשכולות תאים. מאוחר יותר, בצע חילופי מדיום כפי שמצוין בכתב היד.