אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:00 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם מושבות של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים או hPSCs המחוברים למצע מתאים במדיום תרבית.
הסר את המדיום. הוסף מדיום עצבי המכיל מעכבים ספציפיים ודגירה.
מעכבים אלה מכוונים את ההתבגרות של hPSCs לעבר שושלת עצבית, ויוצרים מושבות נוירו-אקטודרמליות. אלה הם קודמים למבנים כדוריים קטנים שנקראים ספרואידים.
הסר את המדיום ושטוף עם מאגר מלח.
דגירה עם אנזים עיכול כדי לנתק את המושבות מהצלחת.
הוסף את המדיום העצבי כדי לעצור את הפעילות האנזימטית.
אוספים את המושבות ומעבירים אותן לצינור.
הניחו להם להתיישב, ואז השליכו את הסופרנטנט.
השעו מחדש את המושבות במדיום עצבי המכיל גורם גדילה.
מעבירים את המושבות לצלחת מרובת בארות ודוגרים.
גורם גדילה זה מקל על ארגון עצמי והכפלה של תאים נוירואקטודרמליים, מה שמוביל אותם ליצירת ספרואיד.
כדי להתחיל, צלח את מושבות ה-hPSC על מטריצת ממברנת בסיס מוסמכת hESC מבאר אחת של צלחת של 6 בארות במפגש של 60% לשלוש בארות כדי להשיג צפיפות של 20% עד 30%, ולאחר מכן, המשך באינדוקציה של מושבות נוירואקטודרמליות דו-ממדיות.
הוסף מדיה N2 טרייה בתוספת מעכבי SMAD כפולים מדי יום לכל באר במשך 3 הימים הבאים. ליצירת ספרואידים נוירואקטודרמליים תלת מימדיים ממושבות נוירואקטודרמליות דו-ממדיות, הסר 2 מיליליטר של מדיום N2 מצלחת 6 הבארות, ושטוף פעם אחת עם HBSS כדי להבטיח שכל מדיום ה-N2 יוסר.
הוסף 1 מיליליט
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים