טיפוח של נוירוני גנגליון ברשתית עם גליית מעטפת חוש הריח

קחו לדוגמה רשתית של חולדה, שכבה רגישה לאור של העין המכילה נוירונים של גנגליון ברשתית, או RGNs.

מניחים את הרשתית בתמיסת מלח מאוזנת קרה כדי למנוע נזק לרקמות.

מעבירים את הרשתית לתמיסה המכילה פרוטאז ו- DNase וחותכים אותה לחתיכות קטנות יותר.

מעבירים את התכולה לצינור ודוגרים.

הפרוטאז מפרק את המטריצה החוץ-תאית ומשחרר את התאים, בעוד ש-DNase מפרק כל DNA מזהם.

פיפטה למעלה ולמטה כדי לפזר גושי תאים.

הוסף פתרון מעכב כדי לעצור את פעולת הפרוטאז.

צנטריפוגה את התאים כדי ליישב אותם. הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את התאים במצע גידול מתאים.

הוסף את תרחיף התאים הזה לשכבה החד-שכבתית של תאי גליה או OEG המעטפים את הריח, סוג של תא גליה, ודגירה.

ה-RGNs משתלבים בחד-שכבת ה-OEG, ויוצרים את מודל הקוקולטורה להערכת הפוטנציאל הנוירו-רגנרטיבי של OEGs.

מניחים את הרשתית בכלי תרבית תאים P-60 שהוכן בעבר עם 5 מיליליטר EBSS קר. לאחר מכן, העבירו אותו לצלחת תרבית תאים P-60 עם פפאין משוחזר בתוספת 50 מיקרוליטר APV ו-250 מיקרוליטר DNase בתוספת 5 מיקרוליטר APV.

חותכים את הרשתית לחתיכות קטנות בעזרת אזמל. מעבירים את החלקים לצינור פלסטיק של 15 מיליליטר, ומדגרים אותם למשך 30 דקות באינקובטור לח בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מתחת ל-5% פחמן דו חמצני המתסיס כל 10 דקות. נתק גושי תאים על ידי פיפטה למעלה ולמטה עם פיפטה פסטר מזכוכית. לאחר מכ