התמיינות תאי גוף עובריים לאבות עצביים באמצעות חומצה רטינואית

התחל עם תאי גזע עובריים שגודלו על שכבה של תאי הזנה פיברובלסטים, השומרים על תאי הגזע במצבם הלא ממוין.

הוסף אנזימי טריפסין ו-EDTA כדי לשבש את ההידבקות מתא לתא ולנתק את התאים.

מאוחר יותר, הוסיפו מדיום תרבית מועשר בסרום כדי לעצור את פעילות האנזים, והעבירו את תרחיף התא לצינור.

צנטריפוגה לאיסוף התאים, הסרת הסופרנטנט ואז השעיית התאים במדיום המכיל חומצה רטינואית.

הנח טיפות של תרחיף תאים זה על בסיס צלחת תרבית שאינה דביקה.

הפוך את הבסיס ליצירת טיפות תלויות והנח אותו מעל מכסה צלחת התרבות המלא במאגר כדי למנוע את התייבשות הטיפות.

בטיפות תלויות, כוח הכבידה גורם לתאים להתיישב בתחתית, ובסופו של דבר להצטבר למבנים תלת מימדיים הנקראים גופים עובריים.

יתר על כן, התאים סופגים חומצה רטינואית, המווסתת מסלולי איתות תוך תאיים שונים.

אפנון זה ממריץ את ההתמיינות של תאי גזע לתאי אב עצביים בעלי יכולת ייצור נוירונים.

התחל ביצירת גוף עוברי על ידי קצירת תאי גזע עובריים עם 0.25% טריפסין-EDTA למשך 2 עד 5 דקות ב-37 מעלות צלזיוס, 5% פחמן דו חמצני. הוסף את המדיום הטרי של Iscove's Modified Dulbecco או IMDM עם 15% FBS לתאים המנותקים, ולאחר מכן העבר את תרחיף התא לצינור של 15 מיליליטר.

צנטריפוגה בחום של 160 x גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, ספרו את התאים באמצעות המוציטומטר והכינו תרחיף של 5 x 10⁵ תאים למיליליטר ב-IMDM עם 0.5 חומצה רטינואית מיקרו-מולרית לאחר מכן, השתמש בפיפטה בעלת 8 ערוצים ובקצות של 200 מיקרוליטר כדי לצלחת טיפות של 120 מיקרוליטר לכל צלחת פטרי של 100 מיליליטר. הפוך את הכלי ומלא את המכסה ההפוך ב-PBS כדי למנוע התייבשות של טיפות תלויות. תרבית בחום של 37 מעלות צלזיוס, 5% פחמן דו חמצני למשך 3 עד 4 ימים.