אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:01 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת פטרי מצופה פולימר.
הוסף שושלת אוליגודנדרוציטים, או תאי OL למדיום תרבית מתאים ודגירה.
המטען החיובי על ציפוי הפולימר מושך את קרום התא הטעון שלילית, ומשפר את הצמדת התאים למנה. גורמי הגדילה והחומרים המזינים במדיום מקלים על התרחבות התאים.
החלף את המדיום במדיום דל בחומרים מזינים ודגירה.
רמות נמוכות של חומרים מזינים גורמות ללחץ קל בתאים, וגורמות להם להפריש חלבונים, שומנים ומולקולות אחרות, כולל גורמי גדילה וציטוקינים, לחלל החוץ-תאי.
אוספים את המדיום בצינור.
מסנן לעקר את המדיום כדי להסיר פסולת סלולרית ורכיבים בלתי מסיסים.
המסנן המכיל את המולקולות הביו-אקטיביות המסיסות המופרשות על ידי תאי OL נקרא מדיום מותנה אוליגודנדרוציטים או OCM.
אחסן את ה-OCM בטמפרטורות נמוכות יותר עד לשימוש נוסף כדי למנוע פירוק של חלבונים ומולקולות אחרות, ובכך לשמור על יעילות ה-OCM.
צלחת שתיים או שלוש צלחות פטרי מצופות מראש של 100 מילימטר עם 10 מיליליטר של מתלה התא.
דגירה בחממה לחה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מתחת ל-5% פחמן דו חמצני.
במכסה זרימה למינרי בתנאים סטריליים, יש לחדש את מדיום התרבות עם 10 מיליליטר מדיום נמוך Mbb 27 חם.
דגירה למשך יומיים בחממה לחה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מתחת ל-5% פחמן דו חמצני.
כדי לקצור את ה-OCM, אסוף את הסופרנטנט המכיל גורמים המופרשים על ידי אוליגודנדרוציטים. עקר את ה-OCM באמצעות מסנן 0.22 מיקרון.