בידוד נוירונים של גנגליון שיווי משקל מהאוזן הפנימית של עכבר

קחו חצי מראשו של גור עכבר והסירו את המוח.

חותכים את החלק העליון של הגולגולת וכורתים את הרקמה שמסביב כדי לדמיין את הקפסולה האוטית, שכבה חיצונית גרמית המגנה על מבני האוזן הפנימית.

העבירו את הרקמה לצלחת תרבית המכילה מדיום חוצץ.

הפרד את הגרעינים הווסטיבולריים העליונים והתחתונים, המכילים את גופי תאי העצב הווסטיבולריים.

גלח את הרכס הגרמי וקצור את הגנגליון העליון שמתחתיו.

מעבירים את הגנגליון העליון לצלחת טרייה המכילה את המדיום המאגר.

הסר רקמות דבקות מהמשטח כדי לנקות את הגנגליון המבודד.

מניחים את הגנגליון בתמיסה המכילה אנזימים פרוטאוליטיים.

האנזימים מפרקים את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה, ומשחררים את התאים.

העבירו את הגנגליון לצלחת זכוכית מצופה פולימר המכילה מדיום תרבית והפרידו מכנית את הרקמה כדי לשחרר את התאים.

דגירה, המאפשרת לתאים להיצמד ולהקים תרבית נוירונים של גנגליון שיווי משקל.

הוציאו את מוחו של העכבר שהומת באמצעות מספריים כירורגיים סגורים. נתק והסר את עצב הגולגולת כדי לנתק לחלוטין את המוח מהגולגולת. החל מהחלק האחורי של הראש, משוך את החומר הקרומי השקוף בעזרת מלקחיים, ולאחר מכן חתוך את החלק העליון של הגולגולת החוצה באמצעות מספריים כירורגיים.

הסר את עודפי הרקמה מהחלק האחורי של הראש והצוואר, כדי להפוך את אזור הדיסקציה והקפסולה האוטית לנקיים וקלים יותר לגישה. מעבירים את הטישו לצלחת פטרי שנייה עם תמיסת L-15 טרייה. לאחר מכן, אתר את הקפסולה האוטית ואת העצבים השמיעתיים, הווסטיבולרי העליון והעצבים הווסטיבולריים הנחותים. הפרד את הגרעינים העליונים והתחתונים בעזרת מספריים קפיציים קטנים, וחתך את עצב השמיעה.

בעזרת אזמל, גלחו בעדינות את הרכס הגרמי כדי להחליש את האזור הגרמי שמתחתיו העצב צולל לתוך הקפסולה הגרמית. הסר בזהירות את הפסולת בעזרת אזמל, וחשוף את כל החלק הנפוח של הגנגליון.

השתמש במספריים הקפיציים העדינים כדי לחתוך ולהפריד את הגנגליון מענף העצב ההיקפי שצולל לכיוון הרחם. הסר את הגנגליון העליון בעזרת מלקחיים עדינים, והעביר אותו לצלחת פטרי בגודל 35 מילימטר עם תמיסת L-15 טרייה.

לאחר חימום מוקדם של תמיסת האנזים, שפכו את תערובת האנזימים לצלחת פטרי בגודל 35 מילימטר, והניחו אותה בחממה של 37 מעלות צלזיוס למשך 10 עד 15 דקות. נקו את הגנגליון באמצעות מלקחיים עדינים ומספריים קפיציים קטנים על ידי הסרת עצם, רקמות עודפות, סיבי עצב וכל מבנה מיותר אחר. הקפד למזער את הסרת כל רקמת גנגליון.

העבירו את הגרעינים הנקיים לתמיסת האנזים שחוממה מראש, והחזירו אותה לחממה למשך 10 עד 40 דקות. לאחר מכן, העבירו את הגרעינים לצלחת פטרי בגודל 35 מילימטר עם תמיסת L-15 טרייה.

לאחר שתיים-שלוש דקות, העבירו את הגרעינים לצלחת פטרי נוספת בגודל 35 מילימטר מלאה במצע תרבית מסונן. מעבירים כ -150 מיקרוליטר של אמצעי תרבית מסוננים על צלחת תחתית זכוכית מצופה. לאחר מכן, העבירו את המספר הרצוי של הגרעינים לכיסוי.

משוך כמות קטנה של מצע תרבית מכלי התרבית, ושטוף את פיפטת הטריטורציה במדיום כדי למנוע מהרקמה להידבק לדפנות פיפטת הזכוכית. יש לשלש על ידי העברת הרקמה בעדינות ושוב ושוב דרך הפיפטה עד שהגנגליונים מנותקים מספיק.

לאחר חמש דקות, בדוק תחת מיקרוסקופ אור כדי לראות אם התאים התיישבו על הכיסוי. מניחים בזהירות צלחת תרבות בחממה של 37 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 24 שעות.