בידוד וטיפוח תאים מקדימים של אוליגודנדרוציטים מקליפת המוח של גור עכבר

קח קליפת מוח גור עכברים.

הוסיפו אנזים פרוטאוליטי המעכל את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה. לאחר מכן, נתק את הרקמה באופן מכני, ושחרר את התאים.

הוסף מדיה גליאלית ו-DNase כדי לפרק כל DNA מזהם.

לנתק את הרקמה באופן מכני כדי לשחרר נוירונים ותאי גליה.

לאחר שהרקמה הלא מעוכלת מתייצבת, אסוף את המדיה המכילה את התאים והצנטריפוגה. הסר את ה-supernatant.

השעו מחדש תאים במדיה גליה וצלחו אותם על בקבוק מצופה חלבון מטריצה חוץ-תאית.

דגירה. אסטרוציטים נצמדים חזק יותר למשטח המצופה מאשר תאים אחרים. מדיה גליאלית מקדמת רק את הישרדות תאי הגליה.

החלף את המדיה כדי להסיר לכלוך.

דגירה עם טלטול כדי לנתק את תאי מבשר האוליגודנדרוציטים שמעליו, OPCs ומיקרוגליה.

העבירו את המדיה עם התאים לצלחת תרבות.

דגירה עם טלטול כדי להקל על הידבקות דיפרנציאלית של מיקרוגליה.

העבירו את ה-OPC supernatant שאינו דבק על צלחת מרובת בארות מצופה פולי-D-ליזין. דגירה להיצמדות ל-OPC.

החלף את המדיה במדיית OPC, כדי לאפשר צמיחה של OPC.

הוסף 1 מיליליטר של 0.05% טריפסין עם 0.53 מילי-מולרי EDTA לכל צינור עם רקמה. משולש את התערובת עם פיפטה של 10 מיליליטר כ -20 פעמים. לאחר מכן, העבירו את מתלה התא לצינור חרוטי ריק של 50 מיליליטר.

דגרו את התמיסה בחום של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 15 דקות, תוך ערבוב עדין של הליזטים לאחר שמונה דקות. לאחר הדגירה מו