$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
קח קליפת מוח גור עכברים.
הוסיפו אנזים פרוטאוליטי המעכל את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה. לאחר מכן, נתק את הרקמה באופן מכני, ושחרר את התאים.
הוסף מדיה גליאלית ו-DNase כדי לפרק כל DNA מזהם.
לנתק את הרקמה באופן מכני כדי לשחרר נוירונים ותאי גליה.
לאחר שהרקמה הלא מעוכלת מתייצבת, אסוף את המדיה המכילה את התאים והצנטריפוגה. הסר את ה-supernatant.
השעו מחדש תאים במדיה גליה וצלחו אותם על בקבוק מצופה חלבון מטריצה חוץ-תאית.
דגירה. אסטרוציטים נצמדים חזק יותר למשטח המצופה מאשר תאים אחרים. מדיה גליאלית מקדמת רק את הישרדות תאי הגליה.
החלף את המדיה כדי להסיר לכלוך.
דגירה עם טלטול כדי לנתק את תאי מבשר האוליגודנדרוציטים שמעליו, OPCs ומיקרוגליה.
העבירו את המדיה עם התאים לצלחת תרבות.
דגירה עם טלטול כדי להקל על הידבקות דיפרנציאלית של מיקרוגליה.
העבירו את ה-OPC supernatant שאינו דבק על צלחת מרובת בארות מצופה פולי-D-ליזין. דגירה להיצמדות ל-OPC.
החלף את המדיה במדיית OPC, כדי לאפשר צמיחה של OPC.
הוסף 1 מיליליטר של 0.05% טריפסין עם 0.53 מילי-מולרי EDTA לכל צינור עם רקמה. משולש את התערובת עם פיפטה של 10 מיליליטר כ -20 פעמים. לאחר מכן, העבירו את מתלה התא לצינור חרוטי ריק של 50 מיליליטר.
דגרו את התמיסה בחום של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 15 דקות, תוך ערבוב עדין של הליזטים לאחר שמונה דקות. לאחר הדגירה מוסיפים לכל צינור 5 מיליליטר MGM ו -200 מיקרוליטר DNase-I לריכוז סופי של 50 מיקרוגרם למיליליטר. משולש כל ליזאט 10 פעמים עם פיפטה של 10 מיליליטר.
לאחר מכן, הניחו לתרחיף התא לשבת במשך שלוש דקות בטמפרטורת החדר כדי לאפשר לרקמה לא מנותקת להתיישב בתחתית הצינור. העבירו את תרחיפי התאים לצינורות חרוטיים חדשים של 50 מיליליטר, והשאירו מאחור את הרקמה הלא מנותקת. לאחר הצנטריפוגה, השעו מחדש את גלולת התא ב-5 מיליליטר MGM וטריטוציה אותה 20 פעמים.
צלחו את תרחיפי התאים על צלוחיות T-25 מצופות, ודגרו על התאים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. כדי לבצע בידוד תאים מבשר אוליגודנדרוציטים, יש לנער את התאים למשך 15 שעות. לאחר מכן, הוציאו את הסופרנטנט מהבקבוק וצלחו אותו על צלחת פטרי סטרילית.
דגרו על הסופרנטנט בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 30 דקות, תוך ערבוב לאחר 15 דקות כדי להסיר את המיקרוגליה שנותרה. הסר סופרנטנט תאים שאינו נדבק. ספרו את התאים וצלחו אותם על משטח מצופה פולי-D-ליזין בריכוז הרצוי.
החזירו את התאים לחממה למשך שעה לפחות. לאחר מכן, שאפו בעדינות 95% מהמדיה והוסיפו לאט לאט מדיית OPC חמה, תוך הצמדה לדופן הבאר כדי למזער את ההפרעה של OPCs.