טכניקה ליצירת אורגנואידים במוח מתאי גזע עובריים אנושיים

קחו מושבות של תאי גזע עובריים אנושיים, או hESCs, שגודלו על מטריצה תומכת.

שואבים את המדיום ומוסיפים אנזימים המשפילים את המטריצה.

שטפו כדי להסיר את האנזימים. לאחר מכן, הוסיפו מדיום ופיפטה כדי לעקור את המושבות המשוחררות, ושברו אותן לאשכולות קטנים יותר.

מעבירים את האשכולות למדיום טרי ומדגרים, מה שמאפשר לאשכולות ליצור אגרגטים כדוריים.

אפשר לכדורים להתיישב ולהסיר תאים מתים.

דגירה עם מדיום המכיל גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי, או bFGF, לשגשוג תאים.

מלאו במדיה המכילה ריכוזי bFGF יורדים בהדרגה כדי להקל על התמיינות התאים.

הכנס מדיום אינדוקציה עצבי, המקדם התמיינות hESC לתאי גזע עצביים או NSCs, והופך את הכדורים לאורגנואידים המציגים מבנה דמוי שושנה עצבית.

הוסף אנטיביוטיקה כדי למנוע צמיחה של חיידקים מזהמים במהלך תרבית ממושכת.

תאי הגזע העצביים מתמיינים לתאי עצב וגליה, ומפתחים בהדרגה את האורגנואידים למבנה מורכב הדומה לקליפת המוח.

לדלל את תמיסת מלאי הפרוטאז לריכוז עבודה על ידי הוספת 1 מיליליטר מתמיסת המלאי ל-5 מיליליטר של מדיום DMEM או F12 עבור כל צלחת של 6 בארות של hESCs. שאפו והסירו את אמצעי תרבית התאים ואז כסו את ה-hESCs בתמיסת הפרוטאז. מניחים את הצלחות בחממה למשך 10 עד 15 דקות, או עד ששולי המושבות מתעגלים ומתחילים להיפרד מהמטריצה, אך לפני שהם מתעגלים לחלוטין.

הטה את הצלחת, שאב את תמיסת הפרוטאז וש