בידוד ותרבית של נוירונים אוקולומוטוריים, טרוכליאריים ומוטוריים בעמוד השדרה מעובר עכבר

קח עכברה בהריון טרנסגנית והסר את הרחם בניתוח עם עוברים המכילים נוירונים מוטוריים בעלי תווית פלואורסצנטית.

העבירו את הרחם לצלחת עם חיץ קר כקרח תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

השתמש באור נראה כדי לבודד את העוברים.

הסר את הפנים והזנב של העוברים וכוון אותם למצב שכיבה.

באמצעות אות הקרינה, בצע חתך במוח התיכון כדי לחשוף את גרעיני העיניים והטרוכלרים, המכילים נוירונים מוטוריים.

בודד את המוח התיכון המכיל את הגרעין.

פתח את הצד הגבי של המוח האחורי וחוט השדרה. בודד את חוט השדרה, כרת את שני הקצוות ואסוף את העמודים המכילים נוירונים מוטוריים בעמוד השדרה.

טפל ברקמות שנאספו באנזימים כדי להפריד את מטריצת הרקמות. קצור את התאים הבודדים ובודד נוירונים עם תווית פלואורסצנטית באמצעות FACS.

הוסף מדיום תרבית לתאי העצב המבודדים, העביר את התאים למיקרו-צלחת מצופה מצע תרבית, ודגר, מה שמאפשר לתאים להיצמד ולגדול.

שמור על הנוירונים המוטוריים בתרבית.

התחל בקצירת עוברים חיוביים ל-Islet-1 EGF מעכברה בהריון כ-11.5 ימים לאחר ההפריה. רססו את הבטן ביסודיות באתנול, והסירו את הרחם בעזרת מספריים סטריליים ומלקחיים לתחבושת אגודל. שטפו בקצרה את הרחם ב-PBS סטרילי. לאחר מכן, העבירו אותו לצלחת החיתוך המלאה ב-PBS סטרילי מקורר מראש.

תחת האור הבהיר של המיקרוסקופ, הסר בזהירות את העוברים מהרחם באמצעות מספריים מיקרו-דיסקציה, מלקחיים לתחבושת