טיהור תאים מקדימים אנדותל CD31+ באמצעות מיון תאים המופעלים מגנטית
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 5:32 דק׳ • July 8th, 2025
קח תרבית דבקה של תאי אב אנדותל או EPCs, קודמנים לתאי אנדותל מיקרו-וסקולריים במוח.
התרבית, המתקבלת על ידי התמיינות תאי גזע פלוריפוטנטיים, מורכבת מ-EPCs חיוביים לסמן פני השטח CD31 ותאים שליליים CD31 מזהמים.
דגירה עם מגיב דיסוציאציה כדי לנתק את התאים ולסנן לקבלת תרחיף של תא יחיד.
הוסף מדיה לנטרול האנזימים, צנטריפוגה כדי להשליך את הסופרנטנט והשהה מחדש את התאים במאגר.
דגירה עם מגיב חוסם כדי לעכב את קולטני ה-Fc התאיים, ולמנוע תיוג לא ספציפי.
הוסף נוגדן מצומד פלואורופור ספציפי ל-CD31 ודגר כדי לסמן את ה-EPC.
צנטריפוגה והשליכו נוגדנים לא קשורים. דגירה עם קומפלקסים של נוגדנים המכילים נוגדן אחד שנקשר לפלואורופורים.
הכנסת ננו-חלקיקים מגנטיים מצופים פולימר ודגירה, מה שמאפשר לננו-חלקיקים להיקשר לנוגדנים השני של הקומפלקסים.
בעזרת שדה מגנטי, בודד את התאים הקשורים לננו-חלקיקים.
השליכו את ההשעיה עם תאים שליליים CD31 ללא תווית והשעו מחדש את התאים המטוהרים במדיום. ה-EPCs החיוביים ל-CD31 מוכנים לבדיקות במורד הזרם.
ביום החמישי של תרבית תאי האב האנדותליים, שאפו את המדיום מהבארות והוסיפו 1 מיליליטר של מגיב דיסוציאציה לכל באר. דגרו את הצלחת למשך 6 עד 8 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס. בעזרת מיקרופיפטה, יש לפרק ולסינגולר את התאים, לאחר מכן, להעביר את תרחיף התא דרך מסננת תאים של 40 מיקרומטר כדי לסנן לתוך צינור
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים