התמיינות תאי גזע עצביים אנושיים לאבות עצביים ואסטרוציטים

התחל עם נוירוספרות שאינן דבקות, מצבור תלת מימדי של תאי גזע עצביים אנושיים במדיום מותנה שמקורו בתרבית תאים.

מדיום זה מכיל חומרים מזינים, גורמי גדילה ורכיבי מטריצה חוץ-תאיים השומרים על כדאיות התאים.

צנטריפוגה לאיסוף הנוירוספרות.

טפל בהם באנזימי טריפסין ו- DNase, ערבב את התוכן ואז דגירה.

טריפסין משבש את ההידבקות מתא לתא ומקל על ניתוק תאים, בעוד ש-DNase מפרק DNA חופשי כדי למנוע גוש תאים.

פיפטה את התוכן שוב ושוב ליצירת מתלה חד-תאי. לאחר מכן, הוסיפו מעכב טריפסין כדי לנטרל את פעילות האנזים.

צנטריפוגה והסירו את הסופרנטנט, ולאחר מכן השעו מחדש את התאים בתווך התפשטות המכיל גורמי גדילה עצביים.

זרע את מתלה התאים על כיסוי מצופה פולימר המונח בצלחת מרובת בארות. דגירה כדי לאפשר את היצמדות תאי הגזע לפולימר.

יתר על כן, בהתבסס על ספיגה של גורמי גדילה ספציפיים, תאי הגזע מתמיינים לאבות עצביים ואסטרוציטים, המוכנים להבשלה נוספת לסוגי תאים מיוחדים.

לאחר הכנת מדיום תרבית וציפוי תאי גזע עצביים אנושיים על פי פרוטוקול הטקסט, שלפו מהחממה את בקבוק התאים שיש לעבור, והכניסו אותו לארון הבטיחות הביולוגית או BSC. הטה בעדינות את הבקבוק, ואפשר לתאים לשקוע לתחתית המדיום המאוחסן.

העבירו 10 מיליליטר של מדיום לשתי מנות של 5 מיליליטר לצינור נקי של 15 מיליליטר שכותרתו "CM" למדיום מותנה. הקפד לא לשאוב אף אחד מהתאים שהתיישבו ב