יצירת אורגנואידים מוחיים מסוג המוח הקדמי מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי אדם

התחל עם צלחת באר עם חיבור נמוך המכילה תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם או iPSCs במדיום תאי גזע בתוספת מעכב רו-קינאז.

המעכבים נכנסים לתאים, חוסמים את אנזימי הרו-קינאז ושומרים על כדאיות התאים. זה מקדם היווצרות של אגרגטים iPSC.

החלף את המדיום במדיום תאי גזע כדי לאפשר לאגרגטים לצמוח. העבירו אותם לכלי תרבית עם התקשרות נמוכה עם מדיום אינדוקציה קליפת המוח.

המרכיבים של מדיום זה גורמים ל-iPSCs להתמיין לתאים נוירו-אקטודרמליים, קודמן עצבי.

העבירו כל אגרגט נוירואקטודרמלי לסרט עם בארות רדודות.

החלף את המדיום במטריצת קרום מרתף ודגר כדי לאפשר התמצקות מטריצה ולכידת אגרגטים.

העבירו את האגרגטים המשובצים במטריקס לצלחת המכילה מדיום אינדוקציה קליפת המוח ודגרו בתסיסה.

עם הזמן, התאים הנוירואקטודרמליים מנצלים את גורמי ההתמיינות ומתפתחים לתאים נוירו-אפיתליים.

שנה את המדיום למדיום התמיינות אורגנואידי, המאפשר לתאים להתבגר לסוגי תאים מיוחדים יותר, וליצור אורגנואיד מוחי הדומה לקליפת המוח הקדמית.

כדי ליצור אגרגטים של תאי גזע פלוריפוטנטיים, כאשר תרביות תאי הגזע מגיעות למפגש של 70% עד 90%, הוסף 500 מיקרוליטר של מגיב דיסוציאציה של תאים לבאר אחת של צלחת התרבית בת שש הבארות כדי לנתק את התאים.

תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים, המותאמים לתנאי תרבית חד-שכבתית, הם סוג תאים טוב ליצירת אגרגטים מכיוון שהם פחות מועד