בידוד תאי גליה אנטריים מהתת-רירית והלמינה פרופריה של עכבר

קחו קטע מעי דק של עכבר שהופשט בעבר מהשריר האורכי ומקלעת המיאנטרית, שכבות המכילות נוירונים מעיים ותאי גליה.

חותכים את הרקמה ומניחים אותה במאגר המכיל EDTA. דגירה עם נדנדה.

EDTA משבש את הצמתים בין תאים, ומנתק את רירית האפיתל מהלמינה פרופריה והתת-רירית הבסיסית, שכבות רקמת חיבור המכילות תאי גליה אנטריים.

פיפטה שוב ושוב כדי לעקור את תאי האפיתל.

סנן דרך מסננת תאים והשליך את הזרימה.

העבירו את הרקמה למאגר דיסוציאציה לא אנזימטי ודגרו אותה בעזרת נדנדה. מאגר הדיסוציאציה משחרר את הלמינה פרופריה ואת המטריצה החוץ-תאית התת-רירית, ומנתק את התאים.

פיפטה שוב ושוב כדי לנתק עוד יותר את התאים.

סנן דרך מסננת תאים כדי לאסוף את התאים.

צנטריפוגה והשעיית התאים במאגר.

קח בארות מצופות חלבון הידבקות המכילות מצע גידול גליה וצלח את התאים.

הציפוי מקל על הידבקות התאים, בעוד שגורמי הגדילה מקדמים באופן סלקטיבי את התפשטות תאי הגליה, ויוצרים למינה פרופריה ותרבית תאי גליה תת-רירית.

כדי להסיר את רירית האפיתל, ראשית, השתמש במספריים עדינים כדי לחתוך את המעיים לחתיכות של כ-0.5 סנטימטר ולאסוף את החתיכות ב-30 מיליליטר של תמיסת EDTA/HEPES/DPBS קרה כקרח. נדנד את התמיסה המכילה רקמות ב-4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות בכ-60 הטיות לדקה.

הרטיבו מראש פיפטה מפלסטיק של 5 מיליליטר על ידי פיפטינג של מאגר EDTA/HEPES/DPBS למעלה ולמטה פעם אחת,