טיהור נימים ממוח חזירי

קחו למשל מוח חזירי.

הסר את קרומי המוח, קרום המגן המכסה את המוח, כדי למנוע זיהום תאי קרום המוח.

מגרדים את החומר האפור, אזור עשיר בנימים, ואוספים את הרקמה בצלחת תרבית המכילה מדיה.

העבירו את החומר האפור דרך מזרק ללא מחט כדי לשבור את הרקמה.

העבירו את השברים להומוגנייזר והומוגניזציה כדי לפרק את הרקמה עוד יותר, ולשחרר את נימי המוח.

העבירו את ההומוגנאט דרך מסנן עם גודל נקבוביות ספציפי כדי לשמור על הנימים, ולאפשר לתאי מוח אחרים לזרום דרכו.

הנח את המסנן בתמיסה המכילה אנזימים ו- DNase.

האנזימים מנתקים את התאים הדבקים, בעוד ש-DNase מפרק את ה-DNA המזהם, מה שמקל על בידוד נימים טהורים.

שוטפים את הנימים מהפילטר.

הוסף מדיה המכילה חלבוני סרום כדי לנטרל את האנזימים.

העבירו את הנימים לצינור, צנטריפוגה והוציאו את הסופרנטנט. השעו מחדש את הנימים הטהורים במדיה טרייה לניתוח נוסף.

כדי להתחיל בהליך זה, הניחו את המוח בספסל זרימה סטרילי, ושטפו אותם בעדינות עם 1 ליטר PBS בכוס המונחת על קרח. לאחר מכן, הסר בזהירות את קרומי המוח מכל מוח באמצעות מלקחיים דקים. בעזרת אזמל, מגרדים את החומר האפור מהמוח בזה אחר זה, ומעבירים את החומר המבודד לצלחות פטרי המכילות 20 מיליליטר של DMEM/F12 המונחות על קרח.

לפיצול ראשוני, העבירו את חומר החומר האפור דרך מזרק של 50 מיליליטר ללא המחט. חזור על ההליך עבור כל המוחות ואגד את חומר החומ