שיטה לבידוד יחידות נוירו-וסקולריות ממוח חולדה

התחילו עם מכתש זכוכית קר המכיל רקמת מוח קליפת המוח של חולדות, שהיא השכבה החיצונית ביותר של המוח.

הוסף מאגר מיקרו-כלי דם במוח או BMB, המכיל מעכבי פרוטאז.

כעת, הזיזו את העלי למעלה ולמטה כדי לנתק את הרקמה.

תסיסה זו משחררת את היחידות הנוירו-וסקולריות, או NVUs, הכוללות מיקרו-כלי דם, פריציטים, נוירונים ותאי גליה. מעכבי הפרוטאז חוסמים את הפרוטאזות המשוחררות, ומגנים על כלי הדם הזעירים.

מעבירים את התערובת לצינור.

הוסף תמיסת פוליסכריד צפופה. השתמש במערבולת כדי לערבב את התמיסה עם תכולה אחרת באופן אחיד.

צנטריפוגה. הפוליסכרידים הצפופים מאפשרים שקיעה של NVUs, שהם צפופים יותר מפסולת רקמות.

השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את ה-NVUs ב-BMB המכילים מעכב פרוטאז ותמיסת פוליסכריד.

השתמש במערבולת כדי לערבב את התוכן.

חזור על תהליך הצנטריפוגה. השליכו את ה-supernatant כדי להסיר שאריות פסולת.

השעו מחדש את ה-NVUs ב-BMB ואחסנו אותם לניתוח נוסף.

הנח את רקמת המוח בקליפת המוח במכתש זכוכית צונן. לאחר מכן, הוסף 5 מיליליטר BMB עם קוקטייל מעכב פרוטאז. באמצעות הומוגנייזר כוח עילי, הכניסו עלי לתוך המרגמה והומוגניזציה של רקמת המוח באמצעות 15 משיכות למעלה ולמטה ב-3,700 סל"ד. לאחר מכן, שפכו את ההומוגנאט לצינורות צנטריפוגה מסומנים. בין הדגימות, השתמש ב-70% אתנול לניקוי העלי.

כדי לבצע צנטריפוגה, הוסף 8.0 מיליליטר של תמיסת דק