אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:08 דק׳ • July 8th, 2025
בצלחת תרבית, מצפים כיסוי בפוליאורניתין, פולימר טעון חיובי, ודוגרים.
פוליאורניתין יוצר שכבה דמוית רשת המסייעת לתאים טעונים שלילית להיצמד לכיסוי.
הסר את התמיסה ושטוף את הכיסויים בתמיסת מלח חוצצת כדי להסיר פוליאורניתין לא קשור.
הוסף תמיסה המכילה חלבון מטריצה חוץ-תאי הנקרא למינין ודגר.
למינין יוצר מטריצה מעל הכיסוי המצופה פוליאורניתין, ומשפר את חיבור התאים.
השליכו את התמיסה וקחו מספר קטן של תאי גזע עצביים תלויים בתווך נטול גורמי גדילה.
הוסף את התרבות בצפיפות נמוכה זו מעל הכיסוי המוכן בתנועה סיבובית איטית כדי להפיץ את התאים באופן שווה.
בתחילה, מחסור בגורם גדילה מקדם חלוקת תאים.
עם הזמן, תאי גזע מתמיינים לתאי עצב עם הקרנות ארוכות
בסופו של דבר, נוירונים מייצרים מבנים דמויי עמוד שדרה מעל ההקרנות שלהם, כמו הנוירונים הפירמידליים בקליפת המוח.
להכנת תרביות עצביות, הניחו כיסויי זכוכית בכלי תרבית של שש בארות, והוסיפו פוליאורניתין. דגירה למשך הלילה מתחת למכסה המנוע. למחרת, השתמש ב-DPBS כדי לשטוף את הכיסויים שלוש פעמים ולהוסיף למינין. דגירה מתחת למכסה המנוע למשך 10 שעות לפחות.
הכן מדיום תרבות המכיל את המרכיבים הבאים. לאחר מכן, השתמש במדיום כדי לשגר תאי גזע עצביים או תאי גזע עצביים בצפיפות של 50,000 תאים לסנטימטר רבוע, תוך פיפטינג בתנועות סיבוב איטיות על מנת להפחית את התקבצות התאים.