אינדוקציה חוץ גופית של צמתים עצביים-שריריים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מהונדסים המושרים על ידי בני אדם

התחל עם iPSCs אנושיים מהונדסים המכילים התמיינות מיובלסט או קידוד חלבון MYOD, גן המושרה על ידי דוקסיציקלין במדיום תאי גזע המכיל מעכבי רו-קינאז.

העבירו את התאים לצלחות מצופות ECM ודגרו כדי לקדם את החיבור לתאים.

בינתיים, המעכב מנטרל אנזימי רו-קינאז תוך-תאיים, ומשפר את כדאיות התאים.

החלף את המדיום במדיום תאי גזע המכיל דוקסיציקלין.

דוקסיציקלין נכנס לתאים ונקשר לחלבונים מפעילים. קומפלקסים אלה נקשרים למקדם, גורמים לביטוי הגנים בתאים מסוימים ומייצרים חלבוני MYOD, המעוררים התמיינות של תאי גזע לתאי שריר.

טפל בתאים במדיום התמיינות מיוגני המכיל גורמי התמיינות מיוגניים כדי לקדם את היווצרותם של צינורות, תא שריר רב-גרעיני.

מאוחר יותר, הציגו מדיום אינדוקציה עצבית עם גורמי גדילה עצביים.

גורמים אלה מבדילים את ה-iPSCs הנותרים לנוירונים מוטוריים ולתאי שוואן היוצרים מעטפת מיאלין סביב הנוירונים.

לבסוף, החלף את המדיום במדיום צומת עצבי-שרירי כדי לקדם קשרים בין הנוירון המוטורי לשריר השריר, ויוצר צמתים עצביים-שריריים.

שטפו את התאים עם 3 מיליליטר PBS לפני הוספת 1 מיליליטר של תמיסת ניתוק תאים לצלחת פטרי. לאחר 10 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, הוסף 3 מיליליטר של מדיום תאי גזע עובריים של פרימטים לכל באר, ופיפטה בעדינות שלוש פעמים כדי לנתק את התאים מהכיסוי.

לאחר מכן, אחסנו את תאי הגזע המנותקים המכילים סופרנט