השגת תרחיף חד-תאי מרקמת ההיפוקמפוס של העכבר

קח שברי היפוקמפוס של עכבר בוגר בצינור דיסוציאציה המכיל פפאין ו-DNase.

הנח את הצינור על מפריד מכני.

הדיסוציאטור מפרק את הרקמה באופן מכני, ומשחרר תאים, כולל נוירונים ותאי גליה.

פפאין מפרק את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה, ומשחרר תאים. DNase מפרק DNA מזהם.

הוסף בופר המכיל BSA, ומנטרל את האנזימים.

העבירו את המתלה דרך מסננת כדי להסיר פסולת גדולה.

צנטריפוגה את המסנן. השליכו את הסופרנטנט העשיר באנזימים.

השעו מחדש את התאים במאגר, והעבירו אותם לצינור חדש.

הוסף מדיית שיפוע צפיפות, ערבב וכסה את התערובת עם מאגר.

במהלך הצנטריפוגה, תאים ופסולת יוצרים שכבות נפרדות על סמך הצפיפות שלהם.

הסר את שכבת החיץ העליונה ואת שכבת הפסולת האמצעית.

מוסיפים חוצץ לשכבה התחתונה המכילה את התאים ומערבבים. צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט המכיל את מדיית שיפוע הצפיפות.

השעו מחדש את תאי ההיפוקמפוס במאגר להמשך ניתוח.

בעזרת מלקחיים, העבירו את חלקי רקמת ההיפוקמפוס לצינור C, והוסיפו 30 מיקרוליטר של תערובת אנזימים 2 לתוך הצינור. לאחר סיבוב המכסה והידוק עד שיילחץ, הנח את הצינור במפריד והפעל את התוכנית המתאימה. בזמן שהתוכנית פועלת, הרטיבו מראש מסננת תאים של 70 מיקרון המונחת על צינור חרוטי של 50 מיליליטר עם 2 מיליליטר של מאגר BSA.

לאחר השלמת תוכנית הדיסוציאציה, הוסף 4 מיליליטר של מאגר BSA לרקמה המנותקת, וסנן את התערובת דרך מסננת הת