הכנת תרחיף חד-תאי של תאי מערכת החיסון מרקמת המוח המורין

התחל עם מוח עכברי עם תאים עצביים, לא עצביים וחיסוניים בתוך המטריצה החוץ-תאית של המוח או ECM.

טוחנים את הרקמה ומשעים אותה במדיום תרבית.

העבירו את שברי הרקמה הללו לצינור וטפלו בהם באנזימי קולגנאז ו-DNase-I.

קולגנאז מעכל את ה-ECM, ומשחרר תאים בודדים, בעוד ש-DNase-I מפרק DNA חופשי כדי למנוע גוש תאים.

לאחר מכן, הוסף EDTA כדי לנטרל את אנזימי הקולגנאז.

הוסף מדיום תרבותי. צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט.

הוסף תמיסת שיפוע צפיפות ואת מדיום התרבות לגלולת התא, וצור שכבת שיפוע בצפיפות נמוכה.

מערבבים ואז מניחים את התמיסה עם תמיסת שיפוע בצפיפות גבוהה כדי ליצור הפרש צפיפות.

צנטריפוגה במהירות נמוכה להפרדת תאי חיסון בממשק, עם פסולת תאים קלה יותר בחלק העליון ותאי עצב וגליה כבדים יותר בתחתית.

הסירו את השכבה העליונה, אספו את תאי החיסון והעבירו אותם לצינור אחר.

צנטריפוגה והסירו את הסופרנטנט, ואז השעו מחדש את התאים במדיום, ויוצרים תרחיף חד-תאי ליישומים במורד הזרם.

שפכו את רקמת המוח או חוט השדרה עם המדיה לתוך צלחת פטרי בגודל 100 מילימטר, והשתמשו במלקחיים כדי להזיז את הרקמה לתחתית. טחנו את רקמת המוח בעזרת סכין גילוח סטרילי, ואספו את הרקמה בתחתית הצלחת. הוסף 3 מיליליטר של RPMI בתוספת 10% FCS לצלחת הפטרי, ולאחר מכן השתמש בפיפטה סרולוגית של 10 מיליליטר כדי להשעות מחדש את הרקמה במדיה ולהעביר אותה לצינור חרוטי של 1