טכניקה לאופטימיזציה של תרבית אורגנואידים מוחיים באמצעות הארה צידית של אור רך

קח מערך תאורת אור רכה לרוחב המכיל לוח אקרילי המצויד ברפידות לבנות ונורות LED לבנות המותקנות בקצה אחד.

מקם צלחת מרובת בארות עם הידבקות נמוכה המכילה מדיום היווצרות גוף עוברי מלפנים.

הוסף את הגופים העובריים, או EBs לצלחת.

נורת ה-LED נכנסת מהצד של הלוח האקרילי ופולטת אלומות מקבילות, מאירות לרוחב את ה-EBs ומאפשרות הדמיה בעין בלתי.

סובב את הצלחת כדי לגרום לזרימת מערבולת, תוך כינוס ה-EBs למרכז.

החלף את המדיום המושקע במדיום היווצרות EB טרי.

אוספים את ה-EBs באמצעות קצה פיפטה רחב קדח.

החזק את הפיפטה זקופה כדי לאפשר ל-EBs להתיישב על ידי כוח הכבידה.

העבר את ה- EBs לצלחת אחרת בעלת הידבקות נמוכה המכילה מדיום אינדוקציה עצבי.

גע בקצה למדיום. ה-EBs שוקעים עקב מתח פנים נוזלי.

גורמים ספציפיים במדיום יוזמים התמיינות עצבית ב-EBs, ויוצרים שכבה נוירו-אפיתלית.

השתמש בלוח אקרילי שקוף בעובי של 0.3 עד 0.5 סנטימטרים בגודל נייר A5, והדבק רפידות לבנות בחלק הקדמי והאחורי של הצלחת האקרילית. לאחר מכן, התקן שורה של נורות LED לבנות בקצה הצלחת כך שהאורות יוכלו להיכנס מהצד של צלחת האקריליק ולאחר מכן לירות החוצה במקביל.

כעת, הכינו צלחת חדשה עם שש בארות עם הידבקות נמוכה, והוסיפו 2 מיליליטר של מדיום היווצרות EB לכל באר. לאחר הסרת ה-EBs יחד עם המדיום, באמצעות קצה פיפטה רחב קידוח של 1000 מיקרוליטר, העבירו כ-100 EBs לבאר לצלחת ההדבקה הנמוכה של 6 בארות.

כדי להחליף את מדיום היווצרות ה-EB בכל יום באותו נפח של מדיום טרי, גרמו לזרימת מערבולת על ידי סיבוב הצלחת לאורך מסלול מעגלי. ה- EBs או האורגנואידים מתכנסים למרכז הבאר עקב הזרימה המשנית הנוצרת באמצעות סיבוב. שאפו את המדיום הישן על ידי פיפטינג לקצה הבאר לאט. אל תמצוץ חזק מדי, אחרת, ה-EBs יוסרו יחד. לאחר מכן, הוסף מדיה חדשה כדי להשעות מחדש את ה-EBs.

לאינדוקציה עצבית, הכינו צלחת חדשה עם 6 בארות הידבקות נמוכה עם 3 מיליליטר של מדיום אינדוקציה עצבית לבאר. הפעל את האור הרך לרוחב וכבה מקורות אור פנימיים אחרים. כעת, העבירו את ה-EBs לצלחת 6 הבארות עם מדיום אינדוקציה עצבי נוסף על ידי שימוש בקצה פיפטה רחב פה כדי למצוץ גם את ה-EBs וגם את מדיום התרבית. לאחר מכן, החזק את הפיפטה זקופה. ה-EBs ישקעו בהדרגה תחת כוח הכבידה, ויתכנסו לכיוון הפה של קצה הפיפטה.

כאשר הפה של קצה הפיפטה נוגע שוב במשטח הנוזל, ועקב מתח פני הנוזל, ה-EBs שוקעים במהירות לתוך המדיום. דגרו את הדגימות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 24 שעות.