הכנת מצע מיקרו-דפוס לחקר פנוטיפים של תאי Schwann
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:38 דק׳ • July 8th, 2025
קח פרוסת סיליקון עם מיקרו-תבניות של הגיאומטריה הרצויה כדי לגדל תאים בצורה מוגדרת.
יוצקים עליו תערובת פולימרית ומניחים לה להתמצק.
חותכים חותמת מרובעת של הפולימר.
מצפים את פני השטח המעוצב של החותמת בשכבת חלבון, המאפשרת חיבור לתאים.
בעזרת זרם אוויר, הסר חלבונים בלתי מוגבלים.
קח כיסוי מצופה פולימר.
הניחו עליו את הצד המעוצב של החותמת.
לחץ על ה-stamp כדי להעביר את התבנית. הסר את החותמת.
העבירו את הכיסוי לבאר המכילה חומר פעילי שטח לציפוי המשטחים החשופים. זה מגביר את ההידרופוביות של פני השטח, ומונע הידבקות תאים לא רצויה.
הסר את חומר פעילי השטח ושטוף בעזרת מאגר פוספט.
הוסף את תאי שוואן ואפשר להם להיצמד למיקרו-תבנית.
שוטפים עם מאגר כדי להסיר תאים לא מחוברים.
מוסיפים מדיום תרבות ודוגרים.
כאשר התאים גדלים לאורך פני השטח, הם לובשים את צורת המיקרו-תבנית, מה שמאפשר מחקר של פנוטיפ תאי שוואן.
להכנת מצע בתבנית מיקרו, הניחו פרוסת סיליקון מעוצבת בתוך צלחת פטרי עגולה בקוטר 150 מילימטר על גובה 15 מילימטר ושפכו PDMS נטול גז על הוופל. מצקו את ה-PDMS בתנור בחום של 60 מעלות צלזיוס למשך הלילה. אפשרו ל-PDMS להתקרר לטמפרטורת החדר, לאחר מכן, השתמשו באזמל כירורגי כדי לחתוך חותמות של ריבועים בגודל 30 על 30 מילימטרים המכילים את הדפוסים הנכונים, תוך הקפדה לא לפגוע בפרוסת הסיליקון. עקר את חותמות ה-PDMS ואת הכיסויים
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים