בידוד תאי Schwann משורשי עמוד השדרה של העכבר

קח שורש עצב וקוצץ אותו לחתיכות קטנות.

מעבירים לצינור המכיל אנזימי עיכול ודוגרים.

האנזים מעכל את המטריצה החוץ-תאית.

יש להוסיף חומר המכיל סרום כדי לעצור את העיכול.

פיפט את התוכן שוב ושוב, ואז צנטריפוגה והשליך את הסופרנטנט.

השעו מחדש את הגלולה.

העבירו את המתלה דרך מסננת כדי להסיר רקמה לא מעוכלת. דגרו את התאים שנאספו בצלחת.

תאי פיברובלסטים ושוואן או SCs מתחברים לצלחת ומתחלקים.

הסר את התאים הלא מחוברים. שוטפים את התאים המחוברים בעזרת מאגר פוספט.

הוסף אנזימי עיכול כדי לשחרר את ה-SCs הרגישים לעיכול. הפסק את העיכול עם מדיה.

נתק לחלוטין SCs על-ידי הוספת מדיה.

העבירו את התאים לצינור ולצנטריפוגה. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים במדיה ספציפית ל-SC.

מעבירים את התאים לצלחת לא מצופה ודוגרים.

כל הפיברובלסטים שנותרו יידבקו, וישאירו SCs בתלייה.

העבירו את המתלה לצלחת מצופה מטריצה.

דגירה לחיבור וחלוקה של תאי שוואן.

פורסים את העצבים לחתיכות של 3 עד 5 מילימטר בעזרת מספריים. הוסף 1 מיליליטר של 0.25% טריפסין, והעביר את חלקי העצב לצינורות צנטריפוגה של 5 מיליליטר. דגירה בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 18 עד 20 דקות. לאחר מכן, כדי לעצור את העיכול, הוסף 3 עד 4 מיליליטר של DMEM המכיל 10% סרום בקר עוברי. פיפטו את התערובת למעלה ולמטה בעדינות, בערך 10 פעמים. צנטריפוגה בחום של 800 פעמים גרם למשך 5 דקות.

לאחר הצנטריפוגה, השליכו את הסופרנטנט והשעו את המשקעים ב-2 עד 3 מיליליטר של DMEM בתוספת 10% FBS. סנן את מתלה התאים דרך מסנן של 400 רשת, ולאחר מכן השתמש בתרחיף כדי לחסן צלחת פטרי בגודל 60 מילימטר. דגרו על צלחות הפטרי למשך 4 עד 5 ימים בחום של 37 מעלות צלזיוס בנוכחות 5% פחמן דו חמצני.

כאשר התרבית הגיעה למפגש של 90%, שטפו את התאים פעם אחת באמצעות 1X PBS. לאחר מכן, כדי לעכל את תאי שוואן, הוסף 1 מיליליטר של 0.25% טריפסין ב-37 מעלות צלזיוס למנה של 60 מילימטר. לאחר 8 עד 10 שניות בטמפרטורת החדר, עצרו את העיכול על ידי הוספת 3 מיליליטר של DMEM בתוספת 10% FBS. כדי לנתק את תאי שוואן, נשפו בעדינות על התאים בעזרת פיפטה.

ודא במיקרוסקופ שהתאים מנותקים. לאחר מכן, אספו את המדיום, המכיל את תאי שוואן, וצנטריפוגה בטמפרטורה של 800 x גרם למשך 5 דקות. השליכו את הסופרנטנט והשעו את המשקעים ב -3 מיליליטר בינוני. השתמש בתרחיף כדי לחסן צלחות פטרי לא מקודדות בקוטר 60 מילימטר, ודגר את הכלים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 עד 45 דקות. מעבירים את המדיום, שיכיל את תאי שוואן לכלי בינוני מצופה פולי-ליזין, ודוגרים על המנה בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך יומיים.