הכנת צינורות אנדותל מוחיים מעורקים פרנכימליים של עכבר

אבטח מוח עכבר, עם הצד הגחוני כלפי מעלה, בצלחת מצופה פולימר סיליקון המכילה בופר.

נתח קטע רקמה מחצי הכדור סביב עורק המוח האמצעי, או MCA, כאשר קטע הרקמה העליון משתרע מעבר לנקודת ההסתעפות ממעגל וויליס.

אבטח את הרקמה כשה-MCA פונה כלפי מעלה.

הסר את ה-pia mater, עם העורקים, המסתעפים מה-MCA.

אבטח את ה-pia mater עם העורקים. נתח את העורק והסר את הרקמה שמסביב. השלך את כל הענפים הדיסטליים.

דגרו את העורק בקוקטייל אנזים פרוטאוליטי כדי להקל על עיכול חלקי של הקטע.

החלף את האנזימים במאגר והעביר את המקטע המעוכל לתא המכיל חיץ על במת מיקרוסקופ המצוידת בפיפטה טריטורציה.

פיפט את העורק שוב ושוב כדי להסיר את האדוונטיציה המשוחררת, ותאי שריר חלקים, וכתוצאה מכך צינור שלם המכיל תאי אנדותל עורקיים.

הנח את צד המוח הגחוני כלפי מעלה בתא המכיל תמיסת דיסקציה קרה כדי לבודד עורקים פרנכימליים. כדי לבודד עורקים פרנכימליים, אבטח את המוח המבודד עם סיכות פלדה ותמיסת חיתוך קר בצלחת פטרי המכילה ציפוי פולימרי סיליקון בעומק של יותר מ-50 סנטימטרים.

חותכים מלבן של רקמת מוח משתי ההמיספרות עם מספריים חדים ומיושרים סביב ה-MCA, תוך הקפדה על כך שהחלק העליון של קטע הרקמה נמצא מעבר לנקודת ההסתעפות ממעגל וויליס. אבטח את רקמת המוח לתוך הצלחת כשה-MCA פונה כלפי מעלה בעזרת סיכות פלדה. מבצעים בזהירות חתך רדוד ליד הסיכות, ומסירים את הפיה בעזרת מלקחיים קטנים, מקלפים בעדינות מקצה אחד לכיוון השני.

אבטח בזהירות את הפיה המבודדת עם עורקים פרנכימליים המסועפים מ- MCA בצלחת בעזרת הסיכות, ונתח בזהירות את העורקים הפרנכימליים. חתכו את כל הענפים הדיסטליים שנותרו וודאו שהעורק נקי ללא רקמה מחוברת. השתמש בעורק שלם ונקי זה לעיכול אנזימטי. לחלופין, חותכים כל עורק לשני חלקים לעיכול אנזימטי להכנת צינורות אנדותל, אם רוצים.

לעיכול חלקי של מקטעי עורקים, הנח מקטעי עורקים שלמים לתוך 1 מיליליטר של תמיסת דיסוציאציה בצינור זכוכית של 10 מיליליטר המכיל פפאין, דיתיאוריתריטול, קולגנאז ואלסטאז. דגרו מקטעי עורקים בטמפרטורה של 34 מעלות צלזיוס למשך 10 עד 12 דקות.

כדי לבודד את צינור האנדותל העורקי, הנח את פיפטת הטריטורציה המחוברת למזרק המיקרו-מזרק בתמיסת הדיסוציאציה בתא ומקם אותה קרוב לקצה אחד של קטע הכלי המעוכל. הגדר קצב בטווח של 1 עד 3 ננוליטר לשנייה בבקר המשאבה למשך טיפול עדין. תוך שמירה על הגדלה פי 100 עד פי 200, משוך את מקטע העורק לתוך הפיפטה, ולאחר מכן הזריק כדי לנתק את האדוונטיציה ותאי השריר החלק. יש לשלש את מקטע כלי הדם עד שכל תאי השריר החלק מתנתקים ורק תאי האנדותל נשארים כצינור שלם.