יצירת מודל תרבית איברים פרו-דלקתי המדמה מחלת דיסק בין-חולייתי מוקדמת

קח זנב בקר.

הסר את הרקמה העליונה ואת תהליכי החוליות, ואז חתוך לרוחב כדי להשיג מקטעים.

זהה את הדיסק הבין חולייתי או IVD, הממוקם בין לוחות הצמיחה ללוחות קצה החוליות.

חותכים משני צידי ה- IVD ומניחים אותו בכלי המכיל גזה ספוגה בבופר כדי לשמור על חיוניות הרקמות.

גרד כל רקמת חוליה מחוברת ומדוד את גובה ה- IVD.

שטפו עם חוצץ כדי להסיר שאריות דם ולחטא את ה-IVD במאגר המכיל אנטיביוטיקה.

הנח את ה-IVD בתאי ביו-ריאקטור המכילים מדיה.

בתקשורת בקבוצה הפיזיולוגית יש גלוקוז גבוה, ואילו בקבוצה הפתולוגית, מדיום דל גלוקוז גורם למחסור בחומרים מזינים.

הנח את התאים בביו-ריאקטור.

עבור IVD הפיזיולוגי, הפעל עומס עדין מדי יום. עבור ה- IVD הפתולוגי, הפעל עומס אינטנסיבי בקצב גבוה יותר מדי יום.

בין בדיקות ההעמסה היומיות, אפשר ל-IVD להתאושש במדיה.

לאחר כל הליכי ההעמסה, מדוד את גבהי ה- IVD.

גובה מופחת ב-IVDs הפתולוגיים מעיד על מצב ניווני ופרו-דלקתי.

התחל בשטיפה יסודית של כל זנב הבקר במי ברז כדי להסיר לכלוך ושיער על פני השטח. לאחר מכן, טבלו את הזנב בתמיסת בטאדין 1% למשך 10 דקות כדי לחטא את פני השטח. השתמש באזמל מספר 20 כדי להסיר את הרקמה הרכה מעמוד השדרה הזנבי כדי להקל על זיהוי הדיסקים הבין חולייתיים או IVD.

הסר את התהליכים הקוצניים והרוחביים של החוליות בעזרת צבת להסרת עצם. חותכים לרוחב עם צבת עצם דרך אמצע כל גוף חוליה כדי לקבל קטעי תנועה בודדים, ואז מכניסים את מקטעי התנועה שנאספו לצלחת פטרי עם גזה רטובה בתמיסה של רינגר.

אתר את ה- IVD והחוליות על ידי הזזת קטעי התנועה בעדינות. לאחר מכן, זהה את מיקום לוחית הגידול על ידי נגיעה ומציאת הצד הקמור של לוחית הקצה הגרמית. קררו את להב המסור עם התמיסה של רינגר, והשתמשו בו כדי לבצע שני חתכים מקבילים בלוחית הגידול של ה-IVD, אחד מכל צד.

העבירו את ה-IVD לצלחת פטרי נקייה עם גזה נקייה שהורטבה בתמיסת רינגר. מגרדים את גוף החוליה ואת לוחית הצמיחה באמצעות להב האזמל, ומשאירים את לוחית הקצה שלמה. מקם את שני המשטחים שטוחים ומקבילים להליך ההעמסה, והעביר IVDs מגורדים לצלחת פטרי טרייה עם גזה רטובה בתמיסת רינגר.

מדוד את גובה וקוטר הדיסק בעזרת קליפר. לאחר מכן, נקו את קרישי הדם בעצם החוליות עם התמיסה של רינגר באמצעות מערכת שטיפת סילון. חיטוי IVDs ב- PBS ו -10% פניצילין-סטרפטומיצין, עם ניעור למשך 15 דקות. שטפו את האנטיביוטיקה בריכוז גבוה עם PBS וסטרפטומיצין פניצילין 1%.

העבירו דיסקים לתאי IVD המכילים 5 מיליליטר של מדיום תרבית IVD, והניחו אותם במערכת הביוריאקטור עם אינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 85% לחות ו-5% פחמן דו חמצני. תרבית הדיסקים במשך ארבעה ימים בתוך מערכת ביו-ריאקטור על ידי שמירה על תנאי טעינה שונים בהתאם לקבוצות הניסוי.

בקבוצת הביקורת הפיזיולוגית, תרבית את ה-IVDs עם מדיום גלוקוז גבוה באמצעות פרוטוקול העמסה של 0.02 עד 0.2 מגה-פסקל ו-0.2 הרץ למשך שעתיים ביום. בקבוצה הפתולוגית, תרבית את ה-IVDs עם מדיום גלוקוז נמוך באמצעות פרוטוקול העמסה של 0.32 עד 0.5 מגה-פסקל ו-5 הרץ למשך שעתיים ביום.

בין הליכי ההעמסה, הנח את ה-IVD בצלחות של שש בארות עם 7 מיליליטר של מדיום תרבית IVD להתאוששות נפיחות חופשית. מדוד את גובה הדיסק מדי יום עם קליפר לאחר תקופת הנפיחות החופשית ולאחר טעינה דינמית למשך הניסוי.