אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:19 דק׳ • July 8th, 2025
קח השעיה של תאים ופסולת מסיבי עצב סיאטיים של עכברים מעוכלים אנזימטית.
עוברים דרך מסננת, מסירים פסולת.
צנטריפוגה את המסנן והסר את הסופרנטנט.
השעו מחדש את התאים במדיה המכילה סרום וזרעו אותם על צלחת תרבית מצופה חלבון הידבקות.
דגירה להדבקת תאים. החלף את המדיה במדיה סלולרית של Schwann. דגירה להיווצרות חד-שכבתית של תאי שוואן.
הסר את המדיה ושטוף עם מאגר. דגירה עם טריפסין כדי לנתק תאים.
הוסף מדיה המכילה סרום כדי לעצור את הפעילות האנזימטית.
אוספים את התאים והצנטריפוגה. השליכו את הסופרנטנט.
השעו מחדש את התאים במאגר והוסיפו מיקרו-חרוזים מגנטיים מצופים נוגדנים.
דגירה כדי לקשור נוגדנים לגליקופרוטאינים פיברובלסטים.
צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים במאגר, וטענו אותם לתוך עמוד הפרדה מגנטי המכיל כדורים פרומגנטיים הממוקמים בשדה המגנטי של המפריד המגנטי.
השדה המגנטי שומר על הפיברובלסטים הקשורים למיקרו-חרוזים, ומאפשר לאסוף תאי שוואן בזרימה.
העבירו את העצבים המעוכלים לצינור של 50 מיליליטר לצנטריפוגה ב -188 גרם למשך 10 דקות ב -4 מעלות צלזיוס. לאחר השלכת הסופרנטנט, השעו מחדש את הגלולה ב-10 מיליליטר של DMEM המכילים 10% FCS ו-50 מיקרוגרם למיליליטר גנטמיצין.
לאחר מכן, סנן את מתלה התאים דרך מסננת תאים של 100 מיקרומטר. לאחר צנטריפוגה ב-188 גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס, השעו מחדש את הגלול
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים