יצירת פרוסות אמיגדלה מוטות ממוח עכבר

קחו למשל מוח של עכבר שקוע במאגר קר כקרח.

הסר את המוח הקטן וחתוך את החלק הקדמי המכיל את קליפת המוח הקדם-מצחית האמצעית, או mPFC.

חבר את הרקמה לגוש אגר זוויתי, המודבק על שלב דגימת ויברטום.

חבר בלוקים נוספים של אגר כדי לספק יציבות במהלך החיתוך. הנח את הבמה בתוך תא חיתוך הוויברטום המלא במאגר קר קרח מחומצן.

צור פרוסות מוטות המכילות את האמיגדלה המגיבות לגירויי פחד והקרנות עצביות מה-mPFC, היוצרות קשרים סינפטיים באמיגדלה ומווסתות את פעילותה.

הפרוסות המוטות חושפות את ההקרנות, ומאפשרות לחקור את הקישוריות התפקודית בין ה-mPFC לאמיגדלה.

חותכים את הפרוסות לשניים ומניחים אותן בתא המכיל נוזל מוחי מלאכותי מחומצן בטמפרטורת החדר כדי לייצב את הרקמה.

דגרו את הפרוסות בטמפרטורה הפיזיולוגית כדי לשחזר את הרקמה לבדיקות במורד הזרם.

השתמש באזמל כדי לחתוך את המוח הקטן. לאחר מכן, בודדו את החלק הקדמי של המוח המכיל את קליפת המוח הקדם-מצחית האמצעית. מלאו את תא החיתוך בתמיסת חיתוך קרה כקרח שנשמרה על 4 מעלות צלזיוס באמצעות יחידת קירור. חמצן את התמיסה.

כתם את המוח יבש בנייר פילטר. הדביקו את בלוק האגר 4% שנחתך בזווית של 35 מעלות לשלב הרטט, והדביקו את החלק האחורי של רקמת המוח על בלוק זה. הדביקו שני קוביות אגר נוספות לפני ומאחורי גוש המוח ליציבות בזמן החיתוך.

הנח את הבמה עם רקמה מחוברת בתא החיתוך, וודא שהיא שקועה. התחל לחתוך את הפרוסות החדות. חותכים כל פרוסה לשניים, ומעבירים לתא ממשק המסופק עם ACSF מחומצן בטמפרטורת החדר. לאחר חיתוך פרוסות האמיגדלה החריפה, הניחו את תא הממשק באמבט מים בטמפרטורה של 36 מעלות צלזיוס, ואפשרו לפרוסות להתאושש למשך 35 עד 45 דקות.