אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 4:43 דק׳ • July 8th, 2025
קח פיתול משונן, ממוח עכבר במאגר הומוגניזציה קר.
להתנתק מכנית כדי לשחרר נוירונים, גליה ותאי גזע.
חומר הניקוי העדין של המאגר מחלחל לתאים, ומשחרר גרעינים ואברונים אחרים.
מסננים את ההומוגנאט כדי להסיר פסולת רקמות. לאחר מכן, צנטריפוגה, הסר את האברונים והשהה מחדש את מאגר ההומוגניזציה כדי ליז תאים שלמים.
שוב צנטריפוגה, הסר את הסופרנטנט המכיל אברונים משוחררים, והשהה מחדש את הגרעינים במאגר שטיפה.
סנן כדי להסיר כל פסולת, צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט.
הציגו כתם DNA פלואורסצנטי כדי לסמן את כל הגרעינים ונוגדנים מצומדים פלואורופור שנקשרים לאנטיגן הגרעיני העצבי, או NeuN, המסמן את גרעיני הנוירונים.
באמצעות מיון גרעינים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות, זהה אגרגטים בעלי עוצמת פלואורסצנטיות גבוהה יותר של כתמי DNA ותכונות פיזור גבוהות יותר, המפרידים את הגרעינים הבודדים.
לנתח את הגרעינים הבודדים, להפריד את הגרעינים העצביים החיוביים ל-NeuN ולבודד את הגרעינים השליליים של NeuN השייכים לגליה ולתאי הגזע.
הומוגניזציה של הרקמה עם 10 משיכות של עלי A רופף, ואחריו 15 משיכות של עלי B הדוק. העבירו את ההומוגנאט לצינור מקורר מראש של 15 מיליליטר. שוטפים את ההומוגנייזר של Dounce עם 1 מיליליטר HB קר, ומשלבים אותו עם אותו צינור.
הוסף 3 מיליליטר HB לצינור של 15 מיליליטר, ודגר במשך 5 דקות על קרח. מערבבים את תרחיף הגרעינים הז
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים