השגת תרבית תאי גליה מעורבת ממוח עכבר יילוד

התחילו עם מוח של עכבר יילוד והעבירו אותו לצינור המכיל תמיסת אנזים פרוטאוליטית.

האנזימים מפרקים את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה ויוזמים דיסוציאציה של תאים.

שטפו שוב ושוב את הרקמה המעוכלת במצע גידול כדי להסיר את האנזימים.

השתמש בפיפטה בקוטר גדול יותר כדי להזיז את הרקמה שוב ושוב דרך הפיפטה כדי לפרק אותה לשברים קטנים יותר.

לאחר מכן, בעזרת פיפטה בקוטר קטן יותר, המשיכו לנתק את השברים, וצרו תרחיף תאים.

סנן תרחיף זה כדי להסיר גושי תאים ולקבל תרחיף תא יחיד המכיל נוירונים ראשוניים ואוכלוסייה מעורבת של תאי גליה, כולל מיקרוגליה ואסטרוציטים.

זרעו את התאים בבקבוק תרבית המכיל מצע גידול ודגרו כדי לקדם את הדבקתם.

עם הזמן, היעדר גורמי גדילה של נוירונים בתקשורת גורם למוות עצבי.

החלף את המדיה שהוצאה במדיה חדשה. תאי גליה מנצלים את חומרי המזון ומתרבים, ויוצרים תרבית גליה מעורבת של אסטרוציטים ומיקרוגליה.

העבירו את המוח לצינור של 50 מיליליטר המכיל 2 מיליליטר של 0.25% טריפסין-EDTA, ודגרו במשך 15 דקות באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס. שטפו את המוח במדיום גידול טרי, על ידי הוספה והסרה של המדיום. לאחר השלמת השטיפות, הוסף 2 מיליליטר של מדיום גידול לכל מוח, והומוגניזציה על ידי טריטורציה של המוח.

כאשר רקמת המוח אינה קטנה יותר, עברו לפיפטה עם צמצם קטן יותר. בתום הטיטרציה כאשר המתלה שקוף ללא נתחים גלויים, העבירו את המתלה דרך מסננת תאים של 70 מיקרון ליצירת תרבית תא בודד.

לאחר מכן, פיפטה 8 עד 9 מילימטרים של מצע גידול לתוך צלוחיות T75, שתי צלוחיות לכל מוח, והוסיפו 1 מיליליטר של מוח הומוגני לכל בקבוק. לגדל את התאים עד לבידוד ביום ה-16.