אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 4:03 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת מרובת בארות עם היצמדות נמוכה המכילה תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי אדם בגוף עוברי או מדיום EB.
צנטריפוגה ליישוב התאים. דגירה כדי לקדם התפשטות וצבירה של תאים, וליצור גופים עובריים.
מווסתי שושלת התאים מקדמים התמיינות תאים לאבות מיאלואידים.
אספו את ה-EBs הללו והעבירו אותם לקצה של מטריצה חוץ-תאית או צלחת מצופה ECM.
החלף את המדיום במבשר מקרופאגים פרימיטיבי או במדיום התמיינות PMP וערבב בעדינות. דגירה כדי להקל על ההתקשרות של ה-EBs ל-ECM.
מחליפים מחצית מהמדיום ודוגרים.
גורמי הגדילה ההמטופויאטיים מניעים אבות מיאלואידים להתמיין למבשרי מקרופאגים פרימיטיביים, הנפרדים מה-EBs ומופיעים בתווך.
אספו את ה-PMPs הללו וסובבו את התאים. השעו אותם מחדש במדיום התמיינות מיקרוגליה.
זרעו תאים אלה בצלחת מרובת בארות מצופה למינין ודגרו.
PMPs מנצלים את גורמי ההתמיינות והחומרים המזינים, ומתמיינים לתאים דמויי מיקרוגליה, סוג של תא חיסון במוח.
לתאי ציפוי, הוסף 100 מיקרוליטר מהתאים המדוללים לכל באר לצלחת עגולה עם 96 בארות עם הדבקה נמוכה. צנטריפוגה את הצלחת ב -125 פעמים גרם למשך שלוש דקות, ודגירה ב -37 מעלות צלזיוס ו -5% פחמן דו חמצני למשך ארבעה ימים.
ביום השני, בעזרת פיפטה רב-ערוצית, החלף את המדיום הישן של חצי EB במדיום טרי. כדי ליצור מבשרי מקרופאגים פרימיטיביים או PMPs, מצפים את הבארות של צלחת בת 6
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים