אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 5:09 דק׳ • July 8th, 2025
קחו רשתית עכברים המכילה תאי Müller Glial, או MG, ונוירונים.
מניחים אותם בתמיסת דיסוציאציה עם אנזימי עיכול ודוגרים עם נדנוד עדין כדי להבטיח פיזור אנזימים אחיד.
אנזימים אלה מפרקים את המטריצה החוץ-תאית, ומנתקים תאים בודדים.
שלח את הרשתית למעלה ולמטה מספר פעמים כדי לשחרר את התאים.
הוסף מעכב כדי לעצור את פעילות האנזים, ואז צנטריפוגה.
השליכו את הסופרנטנט.
השעו מחדש את התאים במדיה המכילה גורם גדילה ספציפי לתאי MG.
מעבירים את התאים לבאר ודוגרים.
עם הזמן, גורם הגדילה בתקשורת מקל על צמיחה והכפלה של תאי MG בעוד שתאי העצב שאינם מתחלקים מתים.
הסר את המדיה. שוטפים עם מאגר מלח.
דגירה עם אנזים עיכול כדי לנתק את התאים מהבאר.
אוספים את התאים בצינור ואז בצנטריפוגה.
השליכו את הסופרנטנט המכיל את תאי העצב המתים.
השעו מחדש את תאי ה-MG במדיה להמשך ניתוח.
הכן תערובת דיסוציאציה של פפאין DNase I כמתואר בכתב היד. כעת, עם פיפטת העברה מוגדלת, הרם את הרשתית. המתן עד שהרשתית תתייצב בתחתית הקצה, ושחרר את הרשתית, ללא HBSS מוגזם, לתוך הצינור המכיל תערובת פפאין DNase I.
לאחר מכן, הניחו את הצינור על אגוז בחממה ודגרו למשך 10 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס ועם 5% פחמן דו חמצני. לאחר מכן, נתק את התאים על ידי פיפטה בזהירות למעלה ולמטה עם פיפטה של 1 מיליליטר. לאחר ניתוק התאים, הוסיפו 275 מיקרוליטר של מעכב פרוטאז אובומוקואיד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים