בידוד אוכלוסיות תאים מרקמת המוח באמצעות מיון גרעינים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות

העבירו חתיכה של רקמת מוח אנושית קפואה טרייה למטחנה מתאימה המכילה מאגר ליזיס קר.

הזיזו את העלי למעלה ולמטה כדי לשבור את הרקמה באופן מכני, ולשחרר את התאים.

מולקולות הניקוי במאגר הליזיס פותחות את קרום התא ומשחררות את הגרעינים.

העבירו את התכולה לצינור צנטריפוגה מתאים והוסיפו מאגר סוכרוז קר לתחתית הצינור, וצרו שיפוע צפיפות.

צנטריפוגה במהירות גבוהה להפרדת הגרעינים בתחתית הצינור.

השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגרעינים בתמיסת מלח חוצצת.

הוסף נוגדנים מצומדים פלואורופור ספציפיים למטרה לגרעינים ודגירה כדי לאפשר לנוגדנים להיקשר לחלבון הגרעיני המטרה שלו.

הוסף צבע צביעה גרעיני כדי לדמיין את ה-DNA השלם.

בצע מיון גרעינים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות כדי למיין את הגרעינים של אוכלוסיות תאים שונות על סמך אותות פלואורסצנטיים מובחנים.

התחל לנתח כ-200 עד 400 מיליגרם של רקמה מדגימת רקמת קליפת המוח האנושית הטרייה והקפואה. מניחים את הרקמה ברקמת זכוכית של 7 מיליליטר Douncer המכילה 4 מיליליטר של מאגר ליזה קר כקרח על קרח, וטוחנים את הרקמה כ-50 פעמים.

העבירו את ההומוגנאט לצינור פוליפרופילן אולטרה-צנטריפוגה בנפח 12 מיליליטר. השתמש בפיפטה של 5 מיליליטר כדי להוסיף 6.5 מיליליטר של מאגר סוכרוז קר כקרח לתחתית צינור האולטרה-צנטריפוגה מבלי להפריע לממשק בין הסוכרוז להומוגנאט הרקמה.

כדי לאסוף את הגרעינים, אולטרה-צנטריפוגה של הליזאט למשך שעה אחת ב-101,814 פעמים גרם, ושאבו בזהירות את הסופרנטנט והפסולת מבלי להפריע לגלולה. הוסף PBS לצינור האולטרה-צנטריפוגה, והשהה מחדש את גלולת הגרעין.

למיון המופעל פלואורסצנטי של הגרעינים המבודדים, הוסף כ-20 מיקרוליטר מהדגימה המושהית לתמיסת נוגדנים המכילה נוגדן נגד NeuN מצומד לעכבר AlexaFlour555. הוסף כ-20 מיקרוליטר מהדגימה המושהית לתמיסת נוגדנים המכילה נוגדן נגד PAX6 מצומד APC לעכבר. לאחר דגירה של שעה, ב-4 מעלות צלזיוס עם רעידות מוגנות מאור, הוסף DAPI ביחס של 1 ל-1,000 לכל הדגימות והבקרות.