קבלת אוכלוסיות תאים עצביים שונות מהיפוקמפוס של חולדה

קח שברי היפוקמפוס של חולדות מעופשות.

דגירה עם פפאין כדי לעכל את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה ולשחרר תאים, כולל נוירונים, אסטרוציטים ומיקרוגליה.

מוסיפים DNase ומערבבים.

לפרק את הרקמה באופן מכני באמצעות פיפטות בקטרים ההולכים ופוחתים כדי לקבל תרחיף של תא בודד. דגירה כדי שה-DNase יפרק את ה-DNA המזהם.

העבירו את המתלה דרך מסננת, הסירו פסולת.

הוסף מאגר המכיל יונים דו-ערכיים כדי לעצור את הפעילות האנזימטית.

צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט העשיר באנזימים.

כעת, הוסף חרוזים מגנטיים חוצץ ואנטי מיאלין. דגרו כדי שהחרוזים יקשרו את פסולת המיאלין.

לאחר הדגירה, צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט.

השעו מחדש את התערובת במאגר והעמיסו אותה על עמוד הפרדה מגנטי המכיל כדורים פרומגנטיים הממוקמים בשדה המגנטי של הממיין המגנטי.

השדה המגנטי שומר על פסולת מיאלין קשורה בחרוזים מגנטיים בעמודה בזמן שתאים נטולי מיאלין עוברים דרכו.

שטפו את העמודה עם חיץ ואספו את הזרימה המכילה נוירונים, אסטרוציטים ומיקרוגליה.

התחל את הדיסוציאציה העצבית על ידי שימוש בסכיני גילוח סטריליים כדי לחתוך לקוביות כל דגימה שנאספה מרקמות מוח בוגרות לחתיכות קטנות של 30 עד 400 מיליגרם על מכסה של צלחת תרבית בת שש בארות. לאחר מכן טבלו את הרקמה ב-1 מיליליטר של HBSS נטול סידן ומגנזיום, והשתמשו בפיפטה כדי להעביר את הדגימות לצינורות צנטריפוגה סטריליים של 2 מיליליטר.