JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 2:10 דק' • July 8th, 2025
קח השעיה של תאים המתקבלים מתולעי Caenorhabditis elegans טרנסגניות במדיום תרבית.
התרחיף מכיל תאים מרקמות שונות, כולל נוירונים ממערכת העצבים.
התולעים הטרנסגניות הונדסו לבטא חלבון פלואורסצנטי מצומד לטרנספורטר טרנסממברני שלפוחית. טרנספורטר זה, הקיים על שלפוחיות סינפטיות הנושאות את המוליך העצבי אצטילכולין, נמצא בתאי עצב כולינרגיים בכל הגוף.
צנטריפוגה את תרחיף התא והשליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים במדיום תרבית טרי למיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות, או FACS.
נתח את תרחיף התאים באמצעות FACS. הנוירונים הכולינרגיים המסומנים באופן פלואורסצנטי פולטים פלואורסצנטיות בחשיפה לאור באורך גל מתאים, ומפרידים אותם מתאים אחרים ללא תווית.
העבירו את הנוירונים המבודדים לצלחת מרובת בארות. דגרו את התאים בתא לח כדי לשמור על רמת הלחות.
תאי צנטריפוגה מתרחיף התא המבודד ב-10,000 פעמים גרם וב-4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים הגלולים במדיום בתוספת L-15 לצפיפות תאים של לא יותר מ-6 מיליון תאים למיליליטר כדי למנוע עומס יתר על ציטומטר הזרימה. לאחר מכן, מיין תאים לפי ביטוי חיובי GFP באמצעות ציטומטר זרימה המסוגל למיין דגימות.
תאים שליליים ל-GFP יכולים לשמש כבקרה לניתוח שאינו ספציפי לסוג התא. לאחר מכן, צלחו את התאים המבודדים לבארות של צלחת סטרילית של שש בארות. מניחים את הצלחת בכלי פלסטיק. הוסיפו מגבון לח או נייר טישו רך כדי להוסיף לחות לתאים ולדגור בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס.