השגת פרוסות המוח הקטן ממוח אפרוח עוברי

קח ביצית של תרנגולת מופרית בשלב התפתחותי מתאים.

חותכים את הקליפה כדי לגשת לעובר.

אתר ונתח את הראש, ולאחר מכן, העביר אותו לצלחת פטרי המכילה מאגר פוספט צונן.

הסר את העיניים והלסתות.

הפרד את העור מפני השטח של הגולגולת.

לאחר מכן, חותכים ומסירים את עצמות הגולגולת.

נקה את רקמת החיבור שמסביב כדי לחשוף את המוח.

הפרד את המוח הקדמי.

לאחר מכן, נתק את המוח הקטן מהמוח האחורי ומכלי הדם.

מעבירים את המוח הקטן למאגר מלח צונן.

המוח הקטן העוברי מכיל שכבה של תאי אב עצביים המתחלקים במהירות, מה שהופך אותו לבעל ערך למחקרי נוירוגנזה.

הניחו את המוח הקטן על פלטפורמה של קוצץ רקמות.

הסר את המאגר העודף ופרוס את המוח הקטן.

שים חיץ מלח צונן על הפרוסות.

מעבירים את פרוסות המוח הקטן לצלחת פטרי המכילה מאגר מלח צונן.

תחת מיקרוסקופ, הפרד פרוסות בודדות להמשך ניתוח.

כדי להתחיל, הכניסו ביצי עוף חומות מופרות לחממת ביצים בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס עד שהן מגיעות ליום העוברי 14. ביום העוברי 14, חתכו פתח בביצית כדי לחשוף את העובר, וערפו את ראשו של עובר הגוזל בביצה. מניחים את הראש בצלחת פטרי המכילה PBS קר כקרח.

תחת מיקרוסקופ מנתח, השתמש במלקחיים סטנדרטיים כדי לבצע חתך מאחורי כל עין, כל הדרך דרך הרקמה, ולהסיר את העיניים והלסת העליונה. לאחר מכן, בצע חתך שני לאורך כל הלוע כדי להסיר את הלסת התחתונה. לאחר מכן, השתמש במלקחיים סטנדרטיים כדי להסיר את העור מפני השטח של הגולגולת על ידי קילוף שלו. לאחר מכן, הסר את העצמות הקדמיות והקודקודיות, וחשף את המוח.

מהיבט גחוני, הסר את סחוס הלוע ואת המזנכימה העזר. לאחר מכן, הנח את המוח, הצד הגבי כלפי מעלה והסר בזהירות את המזנכימה, הגב למוח האחורי, תוך הקפדה לא לפגוע בפיה. לאחר מכן, בצע חתך לאורך כל הרקמה בין המוח האמצעי למוח האחורי כדי לנתק את המוח האחורי, כולל המוח הקטן. בצע חתכים לאורך כל הרקמה הן בצמתים הצדדיים של המוח הקטן והן בצלחת האלאר של המוח האחורי. הסר את המוח הקטן כולו, תוך הקפדה על שלמות הפיה.

לבסוף, הסר את מקלעת הכורואיד הנוצרת והעביר את המוח הקטן המנותח ל-HBSS קר כקרח. העבירו את כל המוח הקטן לפלטפורמה הסטרילית של קוצץ רקמות, בעזרת מרית או פיפטה פסטר בנפח 3 מיליליטר כשהקצה חתוך כדי להרחיב את הצמצם. הסר את כל הנוזלים העודפים באמצעות פיפטה.

הגדר את מהירות החיתוך של קוצץ הרקמות ל-50% מערכו המרבי. לאחר מכן, חותכים את המוח הקטן בכיוון הנדרש בעובי של 300 מיקרומטר. בעזרת פיפטת פסטר בנפח 3 מיליליטר, מכסים את המוח הקטן הפרוס ב-HBSS קר.

לאחר מכן, העבירו את ה-HBSS והפרוסות לצלחת פטרי בגודל 60 מילימטר המכילה 20 מיליליטר HBSS קר כקרח, באמצעות פיפטת פסטר בנפח 3 מיליליטר עם הקצה החתוך. הנח את צלחת הפטרי מתחת למיקרוסקופ מנתח, מואר במקור אור סיבים אופטיים. לאחר מכן, השתמשו במלקחיים של שען כדי להפריד פרוסות בודדות של רקמת המוח.