התמיינות תאי אב אוטיים לתאי אפיתל חושיים ואחריה אימונוסטיין

תרבית אימורטליזציה של תאים אוטיים רב-פוטנטיים, או iMOP, במדיה.

גורמי גדילה במדיה מקלים על התפשטות iMOP והיווצרות מושבה, ויוצרים אוטוספירות.

אסוף את האוטוספירות ותן להן להתיישב על ידי כוח הכבידה.

הסר את המדיה והוסף אמצעי בידול חסרי גורמי גדילה. צלחת את האוטוספירות.

היעדר גורמי גדילה יוזם התמיינות iMOP לתאי אפיתל חושיים.

אסוף את האוטוספירות המובחנות ותן להן להתייצב.

הסר את המדיה והוסף קיבוע לשמירה על מורפולוגיה תאית.

לאחר מכן, הוסף חומר ניקוי כדי לחלחל ממברנות תאיות וגרעיניות.

הוסף מאגר חוסם כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הציגו נוגדנים ראשוניים המכוונים לסמן התמיינות ספציפי.

הוסף נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור המכוונים לנוגדנים הראשוניים, פלואידין המסומן פלואורסצנטי כדי לצבוע אקטין, וצבע קושר DNA כדי לצבוע את הגרעין.

הרכיבו את האוטוספירות.

באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, דמיין את הצביעה כדי לאשר את התמיינות ה-iMOP.

שלושה ימים לאחר הציפוי, השתמש בשקיעת הכבידה כדי לאסוף אוטוספירות כפי שהוצג קודם לכן. המשך לשאוף את הסופרנטנט, והשעהה בעדינות את התאים ב -2 מיליליטר של מדיום התמיינות אפיתל חושי. לאחר מכן, השתמש בפיפטה בעלת קדח גדול של 10 מיליליטר כדי להעביר את האוטוספירות לצלחת חדשה של 60 מילימטר. הבדיל את האוטוספירות למשך 10 ימים, הוסף 2 מיליליטר של מדיום התמיינות טרי לתרבית כל