הבחנה בין אבות אוטיים רב-פוטנטיים אלמותיים לנוירונים של גנגליון ספירלי והערכת ההתמיינות

קח צלחת מרובת בארות המכילה כיסויים סטריליים המצופים במצע תרבית תאים.

הציגו אבות אוטיים רב-פוטנטיים אימורטליים, או iMOPs, במדיום התמיינות עצבי

.

iMOPs הם קודמים לתאי אוזן פנימית שונים, כולל נוירונים של גנגליון ספירלי, או SGNs, המעבירים מידע שמיעתי למוח.

דגירה, מה שמאפשר לתאים להיצמד למצע. המדיום גורם להתמיינות של ה-iMOPs ל-SGNs.

הוסף קיבוע כדי לגרום לקישור צולב של חלבון, שמירה על מורפולוגיה של תאים ותמיסת דטרגנט לחדירה לממברנות התאים.

הציגו מגיב חוסם כדי למנוע תיוג לא ספציפי.

הוסף נוגדנים מצומדים פלואורופור ספציפיים לסמני התמיינות עצביים ודגר, מה שמאפשר לנוגדנים לסמן את ה-SGNs.

שטפו כדי להסיר נוגדנים לא קשורים, והרכיבו את הכיסויים עם אמצעי הרכבה המכיל כתם גרעיני פלואורסצנטי.

באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, זהה את אותות הנוגדנים כדי לאשר את ההתמיינות של iMOPs ל-SGNs.

ראשית, נקו כיסויי זכוכית עגולים על ידי הנחתם בצלחת סטרילית של 100 מילימטר, וטבילתם באתנול 70%. מערבבים בעדינות את הכיסויים כדי לוודא שהם מכוסים ומשאירים את התבשיל בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר מכן, שטפו את הכיסויים שלוש פעמים ב-PBS סטרילי 1x ולאחר מכן פעם אחת במים סטריליים.

לאחר מכן, הניחו לכיסויים להתייבש על ידי חשיפתם לאור UV בקולט אדים לתרבית רקמות למשך 15 דקות. לשימוש מיידי, הנח כיסוי סטרילי אחד בכל באר של צלחת של