תרבית Ex Vivo והדמיה של פרוסות אוקולומוטוריות מעוברי עכברים טרנסגניים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 4:29 דק׳ • July 8th, 2025
קח עכבר בהריון טרנסגני, בודד בניתוח את הרחם המכיל עוברים, ושטוף אותו כדי להסיר שאריות דם.
הסר את העוברים המכילים נוירונים מוטוריים עם תווית פלואורסצנטית והעביר אותם למכסה של צלחת מרובת בארות.
מוסיפים אגרוז מותך ומצננים את המכסה כדי לגרום להיווצרות ג'ל, ומטמיעים את העוברים.
תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, יישר את הגרעינים האוקולומוטוריים ואת העיניים בקו וחתוך את האגרוז במקביל לקו.
מקבעים עובר על במת דגימה ומניחים אותו בתא רטט מלא במאגר חיתוך קר.
בעזרת הוויברטום יוצרים פרוסות המכילות את הגרעינים האוקולומוטוריים והעיניים. הגרעינים יוצרים את העצבים האוקולומוטוריים השולטים בתנועת העיניים.
מעבירים את הפרוסות לתוספות תרבות בתוך צלחת מרובת בארות המכילה מדיום תרבית ודוגרים.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, צלם במרווחי זמן קבועים כדי להתבונן בנוירונים האוקולומוטוריים המסומנים פלואורסצנטית המרחיבים את האקסונים כדי להגיע לעיניים.
לפני תחילת ההליך, ראשית, אשר את ההריון באמצעות אולטרסאונד ביום העוברי 10.5 מהזדווגות מתוזמנת. קצרו את העוברים, רססו את בטן העכברה ההרה באתנול 70%, והשתמשו במספריים כדי לפתוח את חלל הבטן כדי לחלץ את הרחם. שטפו את הרחם בצלחת פטרי של HBSS קר כקרח לפני שמניחים את האיבר בצלחת פטרי שנייה של HBSS טרי קר כקרח.
תחת מיקרוסקופ מנתח, הסר את העוברים מקרן הרחם, ואת שקי מי השפיר האישיים של
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים